Click-iT™ EdU Pacific Blue™ Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT™ EdU Pacific Blue™ Flow Cytometry Assay Kit
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Invitrogen™

Click-iT™ EdU Pacific Blue™ Flow Cytometry Assay Kit

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Click-iT™ EdU Pacific Blue™フローサイトメトリーアッセイキットにより、従来のBrdU法と比較して、増殖細胞におけるDNA複製を分析するためのシンプルで堅牢なアッセイが可能となります。新たに合成されたDNAは、フローサイトメーターの405 nmレーザーを使用して分析されます。•正確—BrdUアッセイより優れた結果を提示•詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）数量
C1041850アッセイ
製品番号（カタログ番号） C10418
価格（JPY）
144,600
Each
お問い合わせください ›
数量:
50アッセイ
Click-iT™ EdU Pacific Blue™フローサイトメトリーアッセイキットにより、従来のBrdU法と比較して、増殖細胞におけるDNA複製を分析するためのシンプルで堅牢なアッセイが可能となります。新たに合成されたDNAは、フローサイトメーターの405 nmレーザーを使用して分析されます。

•正確—BrdUアッセイより優れた結果を提示
• 高速—わずか90分で完了
• 経済的—キットあたりのアッセイ数の増加

フローサイトメトリー用のすべてのClick-iT™ EdUおよびClick-iT™ Plus EdUアッセイの選択ガイドを表示。

BrdUより優れた結果が得られる先進的な方法
増殖解析のもっとも正確な方法は、DNA合成の直接測定です。当初は、放射性ヌクレオシド、すなわち、3H-チミジンを組み込むことで実施されていました。この方法は、ヌクレオシドアナログブロモデオキシウリジン（BrdU）の抗体ベースの検出に置き換えられました。Click-iT™ EdUフローサイトメトリーアッセイキットは、BrdUアッセイに代わる新しいアッセイキットです。EdU（5-エチニル-2´-デオキシウリジン）は、活性DNA合成の際にDNAに取り込まれるチミジンアナログです。検出は、クリックケミストリー（銅触媒を用いたアジドとアルキンの共有結合反応）に基づいています。このアプリケーションでは、アルキンはEdUのエチニル部位に、アジドはAlexa Fluor™ 488色素、Alexa Fluor™ 647色素、またはPacific Blue™色素に結合しています。標準的なフローサイトメトリー法は、集団中のS期細胞の割合を決定するために使用されます（図1）。

穏やかな条件で、細胞周期色素や抗体を使用可能
Click-iT™ EdU標識の利点は、アッセイを実行している間に明らかになります（図2）。アジ化色素のサイズは小さいため、穏やかな条件下で組み込まれたEdUを効率的に検出できます。また、標準的なアルデヒドベースの固定および界面活性剤の浸透は、Click-It™検出試薬でDNAにアクセスするのに十分です。これは、抗BrdU抗体で検出できるようにBrdUを露出させるためにDNAの変性（HCl、熱、またはDNaseによる消化）を必要とするBrdUアッセイとは対照的です。BrdUアッセイのサンプル処理は、HCl法を使用した場合、細胞周期分布のシグナル変化や抗原認識部位の破壊を引き起こす可能性があります。対照的に、使いやすいEdU細胞増殖キットは、細胞周期色素に対応しています。このEdUアッセイキットは表面マーカーや細胞内マーカーに対する抗体とのマルチプレックス化することもできます。

迅速でシンプルなプロトコル
Click-iT™ EdUプロトコルは、免疫組織化学的抗体標識のためのアルデヒド固定と洗剤浸透ステップに基づいていますが、EdUはサポニンやメタノールを含む他の固定／浸透剤と互換性があります。わずか5ステップで細胞増殖データを分析できます。

•細胞のEdUM処理
• 細胞の固定および浸透処理
•Click-iT™検出カクテルでS期細胞を30分間検出
•1回の洗浄
• 分析

正確な結果を経済的に取得
キットあたりのアッセイ数を増やすことで、Click-IT™ EdU Pacific Blue™フローサイトメトリーアッセイキットは従来のBrdUアッセイよりも安価で、大規模な実験に最適です。

研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
検出法蛍光
染色剤タイプPacific Blue™
フォーマットチューブ
グリーン機能危険性が低い
数量50アッセイ
出荷条件室温
Emission404⁄450
使用対象 (装置)フローサイトメーター
製品ラインClick-iT、Pacific Blue
製品タイプFlow Cytometry Assay Kit
Unit SizeEach
組成および保存条件
EdU（5-エチニル-2'-デオキシウリジン）、Pacific Blue™アジド、無水ジメチルスルホキシド（DMSO）、Click-iT™固定剤、Click-iT™サポニンベースの透過処理および洗浄バッファー、銅（II）硫酸、Click-iT™ EdU添加バッファーを含みます。
  • 2℃～8℃で保存してください
    • 乾燥した状態で、遮光してください。

    よくあるご質問（FAQ）

    Click-iT® EdU kitを用いて 細胞増殖アッセイを行っています。 どのポイントで途中停止をかけられますか？ あるいは、全てのステップを連続して行う必要がありますか？

    EdU はDNAに化学的に取り込まれています。 そのため、サンプルを固定後、PBSを加えて4℃で一晩保存することが可能です。また、クリック反応により、Alexa Fluor® azide はEdUに共有結合で結合します。 そのため、クリック反応後も、PBS中で 4℃で一晩保存することが可能です。

    Click-iT Plus EdU Imaging Kit は、今までの Click-iT EdU Imaging Kit と何が異なるのですか？

    Click-iT EdU Imaging Kit では、反応バッファーに含まれていた銅イオンによって、GFPやR-PEが消光するなど、他の検出系との互換性の問題がありました。 Click-iT Plus EdU Imaging Kit では、銅イオンにキレート剤を付加することにより他の物質への影響を減少させました。 それに伴い、今までの Alexa Fluor azide を Alexa Fluor picolyl azide という物質に変更することで、クリック反応そのものの効率が落ちないようにしています。　Click-iT Plus EdU Flow Kit につきましても同様です。

    What are the main characteristics of a Click-iT reaction?

    Click reactions have several general characteristics: the reaction is efficient, no extreme temperatures or solvents are required, the reaction is complete within 30 minutes, the components of the reaction are bio-inert, and perhaps most importantly, no side reactions occur-the label and detection tags react selectively and specifically with one another. This final point is a key advantage of this powerful detection technique; it is possible to apply click chemistry-labeled molecules to complex biological samples and detect them with unprecedented sensitivity due to the extremely low background of the reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

    I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

    One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Viability, Proliferation, Cryopreservation, and Apoptosis Support Center.

    Can I combine Click-iT or Click-iT Plus reactions with phalloidin conjugates used for actin staining?

    We do not recommend using phalloidin conjugates for staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions since phalloidin is extremely sensitive to the presence of copper.

    For staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions, we recommend using anti-α-actin antibodies for staining actin in the cytoskeleton. You can find a list of our actin antibodies here.

    Another option would be to use the Click-iT Plus Alexa Fluor Picolyl Azide Toolkit (Cat. Nos. C10641, C10642, C10643). These Click-iT Plus toolkits provide Copper and Copper protectant separately which makes it easier to titrate the copper concentration to obtain optimal labeling with minimal copper-mediated damage. You may need to optimize the click reaction with the lowest possible concentration of copper and then perform the phalloidin staining.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

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    引用および参考文献 (5)

    引用および参考文献
    Abstract
    Accumulation of CD11b+ lung dendritic cells in response to fungal infection results from the CCR2-mediated recruitment and differentiation of Ly-6Chigh monocytes.
    Authors:Osterholzer JJ, Chen GH, Olszewski MA, Curtis JL, Huffnagle GB, Toews GB,
    Journal:J Immunol
    PubMed ID:19933856
    'Pulmonary clearance of the encapsulated yeast Cryptococcus neoformans is associated with the CCR2-mediated accumulation of lung dendritic cells (DC) and the development of a T1 adaptive immune response. The objective of this study was to identify the circulating DC precursor(s) responsible for this large increase in lung DC numbers. An ... More
    Enhanced expression of fibroblast growth factor receptor 2 IIIc promotes human pancreatic cancer cell proliferation.
    Authors:Ishiwata T, Matsuda Y, Yamamoto T, Uchida E, Korc M, Naito Z,
    Journal:Am J Pathol
    PubMed ID:22440254
    'In pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), the fibroblast growth factor receptor 1 (FGFR-1) IIIb isoform correlates with the inhibition of cancer cell proliferation, migration, and invasion, whereas FGFR-1 IIIc enhances cancer cell proliferation. The FGFR-2 IIIb isoform is expressed in PDAC, and its expression correlates with increased venous invasion. We examined ... More
    Loss of epidermal Evi/Wls results in a phenotype resembling psoriasiform dermatitis.
    Authors:Augustin I, Gross J, Baumann D, Korn C, Kerr G, Grigoryan T, Mauch C, Birchmeier W, Boutros M,
    Journal:
    PubMed ID:23918954
    Cells of the epidermis renew constantly from germinal layer stem cells. Although epithelial cell differentiation has been studied in great detail and the role of Wnt signaling in this process is well described, the contribution of epidermal Wnt secretion in epithelial cell homeostasis remains poorly understood. To analyze the role ... More
    IL-7 abrogates suppressive activity of human CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells and allows expansion of alloreactive and autoreactive T cells.
    Authors:Heninger AK, Theil A, Wilhelm C, Petzold C, Huebel N, Kretschmer K, Bonifacio E, Monti P,
    Journal:J Immunol
    PubMed ID:23129754
    CD4(+)CD25(+)FOXP3(+) regulatory T cells (Tregs) control the activation and expansion of alloreactive and autoreactive T cell clones. Because uncontrolled activation and expansion of autoreactive T cells occur in an IL-7-rich environment, we explored the possibility that IL-7 may affect the function of Treg. We show that the functional high-affinity IL-7R ... More
    13q14 deletions in CLL involve cooperating tumor suppressors.
    Authors:Palamarchuk A, Efanov A, Nazaryan N, Santanam U, Alder H, Rassenti L, Kipps T, Croce CM, Pekarsky Y,
    Journal:Blood
    PubMed ID:20071661
    B-cell chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the most common human leukemia. 13q14 deletions are most common chromosomal alterations in CLL. We previously reported that miR-15/16 is a target of 13q14 deletions and plays a tumor suppressor role by targeting BCL2. Because DLEU7 is located near miR-15/16 and is also positioned ... More