Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488 Flow Cytometry Assay Kit
Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488 Flow Cytometry Assay Kit
Citations & References (9)
Invitrogen™

Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488 Flow Cytometry Assay Kit

Green features
Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488フローサイトメトリーアッセイキットにより、従来のBrdU法と比較して、増殖細胞におけるDNA複製を分析するためのシンプルで堅牢なアッセイが可能となります。新たに合成されたDNAは、フローサイトメーターの488 nmレーザーを使用して分析されます詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）数量
C1042550 assays
C10420100 assays
製品番号（カタログ番号） C10425
価格（JPY）
143,500
Each
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数量:
50 assays
Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488フローサイトメトリーアッセイキットにより、従来のBrdU法と比較して、増殖細胞におけるDNA複製を分析するためのシンプルで堅牢なアッセイが可能となります。新たに合成されたDNAは、フローサイトメーターの488 nmレーザーを使用して分析されます。

•正確--BrdUアッセイより優れた結果を提示
• 高速--わずか90分で解析が完了
• 経済的--

キットあたりのアッセイ数の増加フローサイトメトリー用の すべてのClick-iT™ EdUおよびClick-iT™ Plus EdUアッセイの選択ガイドを表示。

BrdUより優れた結果が得られる先進的な方法
増殖解析のもっとも正確な方法は、DNA合成の直接測定です。当初は、放射性ヌクレオシド、すなわち 、3H-チミジンを組み込むことで実施されていました。この方法は、ヌクレオシドアナログブロモデオキシウリジン（BrdU）の抗体ベースの検出に置き換えられました。Click-iT™ EdUフローサイトメトリーアッセイキットは、BrdUアッセイに代わる新しいアッセイキットです。EdU（5-エチニル-2´-デオキシウリジン）は、活性DNA合成の際にDNAに取り込まれるチミジンアナログです。検出は、クリックケミストリー（銅触媒を用いたアジドとアルキンの共有結合反応）に基づいています。このアプリケーションでは、アルキンはEdU のエチニル部位に、アジドはAlexa Fluor™ 488色素、Alexa Fluor™ 647色素、またはPacific BlueTM色素に結合しています。標準的なフローサイトメトリー法は、集団中のS期細胞の割合を決定するために使用されます（図1）。

穏やかな条件で、細胞周期色素や抗体を使用可能
Click-iT™ EdU標識の利点は、アッセイを実行している間に明らかになります（図2）。アジ化色素のサイズは小さいため、穏やかな条件下で組み込まれたEdUを効率的に検出できます。また、標準的なアルデヒドベースの固定および界面活性剤の浸透は、Click-It™検出試薬でDNAにアクセスするのに十分です。これは、抗BrdU抗体で検出できるようにBrdUを露出させるためにDNAの変性（HCl、熱、またはDNaseによる消化）を必要とするBrdUアッセイとは対照的です。BrdUアッセイのサンプル処理は、HCl法を使用した場合、細胞周期分布のシグナル変化や抗原認識部位の破壊を引き起こす可能性があります。対照的に、使いやすいEdU細胞増殖キットは、細胞周期色素に対応しています。このEdUアッセイキットは、表面マーカーや細胞内マーカーに対する抗体とのマルチプレックス化も可能です。

迅速でシンプルなプロトコル
Click-iT™ EdUプロトコルは、免疫組織化学的抗体標識のためのアルデヒド固定と洗剤浸透ステップに基づいていますが、EdUはサポニンやメタノールを含む他の
固定／浸透剤と互換性があります。わずか5ステップで細胞増殖データを分析できます。

•細胞のEdUM処理
• 細胞の固定および浸透処理
•Click-iT™検出カクテルでS期細胞を30分間検出
•1回の洗浄
• 分析

正確な結果を経済的に取得
キットあたりのアッセイ数を増やすことで、Click-IT™ EdU Alexa Fluor™ 488フローサイトメトリーアッセイキットは従来のBrdUアッセイよりも安価で、大規模な実験に最適です。

研究用途にのみご使用ください。ヒトおよび動物の治療または診断用には使用できません。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
検出法蛍光
染色剤タイプAlexa Fluor™ 488
フォーマットチューブ
グリーン機能危険性が低い
数量50 assays
出荷条件室温
Emission488
使用対象 (装置)フローサイトメーター
製品ラインClick-iT
製品タイプFlow Cytometry Assay Kit
Unit SizeEach
組成および保存条件
EdU（5-エチニル-2'-デオキシウリジン）、Alexa Fluor™ 488アジド、無水ジメチルスルホキシド（DMSO）、Click-iT™固定剤、Click-iT™サポニンベースの透過処理および洗浄バッファー、銅（II）硫酸、Click-iT™ EdU添加バッファーを含みます。
  • 2℃～8℃で保存してください
    • 乾燥した状態で、遮光してください。

    よくあるご質問（FAQ）

    Click-iT® EdU kitを用いて 細胞増殖アッセイを行っています。 どのポイントで途中停止をかけられますか？ あるいは、全てのステップを連続して行う必要がありますか？

    EdU はDNAに化学的に取り込まれています。 そのため、サンプルを固定後、PBSを加えて4℃で一晩保存することが可能です。また、クリック反応により、Alexa Fluor® azide はEdUに共有結合で結合します。 そのため、クリック反応後も、PBS中で 4℃で一晩保存することが可能です。

    Click-iT Plus EdU Imaging Kit は、今までの Click-iT EdU Imaging Kit と何が異なるのですか？

    Click-iT EdU Imaging Kit では、反応バッファーに含まれていた銅イオンによって、GFPやR-PEが消光するなど、他の検出系との互換性の問題がありました。 Click-iT Plus EdU Imaging Kit では、銅イオンにキレート剤を付加することにより他の物質への影響を減少させました。 それに伴い、今までの Alexa Fluor azide を Alexa Fluor picolyl azide という物質に変更することで、クリック反応そのものの効率が落ちないようにしています。　Click-iT Plus EdU Flow Kit につきましても同様です。

    I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

    One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Viability, Proliferation, Cryopreservation, and Apoptosis Support Center.

    Can I combine Click-iT or Click-iT Plus reactions with phalloidin conjugates used for actin staining?

    We do not recommend using phalloidin conjugates for staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions since phalloidin is extremely sensitive to the presence of copper.

    For staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions, we recommend using anti-α-actin antibodies for staining actin in the cytoskeleton. You can find a list of our actin antibodies here.

    Another option would be to use the Click-iT Plus Alexa Fluor Picolyl Azide Toolkit (Cat. Nos. C10641, C10642, C10643). These Click-iT Plus toolkits provide Copper and Copper protectant separately which makes it easier to titrate the copper concentration to obtain optimal labeling with minimal copper-mediated damage. You may need to optimize the click reaction with the lowest possible concentration of copper and then perform the phalloidin staining.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

    Are the Alexa Fluor azides from Click-iT EdU kits available separately?

    Yes, but the standalone products are not shipped at the same amount as provided in the Click-iT EdU kits; the amount of dye-azide provided in the Click-iT kits is proprietary information. See these catalog numbers for the standalone products:
    - Cat. No. A10266: Alexa Fluor 488 azide
    - Cat. No. A10270: Alexa Fluor 594 azide
    - Cat. No. A10277: Alexa Fluor 647 azide

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

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    引用および参考文献 (9)

    引用および参考文献
    Abstract
    Inositol pyrophosphate synthesis by inositol hexakisphosphate kinase 1 is required for homologous recombination repair.
    Authors:Jadav RS, Chanduri MV, Sengupta S, Bhandari R,
    Journal:J Biol Chem
    PubMed ID:23255604
    'Inositol pyrophosphates, such as diphosphoinositol pentakisphosphate (IP(7)), are water-soluble inositol phosphates that contain high energy diphosphate moieties on the inositol ring. Inositol hexakisphosphate kinase 1 (IP6K1) participates in inositol pyrophosphate synthesis, converting inositol hexakisphosphate (IP(6)) to IP(7). In the present study, we show that mouse embryonic fibroblasts (MEFs) lacking IP6K1 ... More
    H. pylori virulence factor CagA increases intestinal cell proliferation by Wnt pathway activation in a transgenic zebrafish model.
    Authors:Neal JT, Peterson TS, Kent ML, Guillemin K,
    Journal:Dis Model Mech
    PubMed ID:23471915
    'Infection with Helicobacter pylori is a major risk factor for the development of gastric cancer, and infection with strains carrying the virulence factor CagA significantly increases this risk. To investigate the mechanisms by which CagA promotes carcinogenesis, we generated transgenic zebrafish expressing CagA ubiquitously or in the anterior intestine. Transgenic ... More
    CXCL12-CXCR4 signaling is required for the maintenance of mouse spermatogonial stem cells.
    Authors:Yang QE, Kim D, Kaucher A, Oatley MJ, Oatley JM
    Journal:J Cell Sci
    PubMed ID:23239029
    'Continual spermatogenesis relies on the activities of a tissue-specific stem cell population referred to as spermatogonial stem cells (SSCs). Fate decisions of stem cells are influenced by their niche environments, a major component of which is soluble factors secreted by support cells. At present, the factors that constitute the SSC ... More
    An organotypic coculture model supporting proliferation and differentiation of medullary thymic epithelial cells and promiscuous gene expression.
    Authors:Pinto S, Schmidt K, Egle S, Stark HJ, Boukamp P, Kyewski B,
    Journal:J Immunol
    PubMed ID:23269248
    Understanding intrathymic T cell differentiation has been greatly aided by the development of various reductionist in vitro models that mimic certain steps/microenvironments of this complex process. Most models focused on the faithful in vitro restoration of T cell differentiation and selection. In contrast, suitable in vitro models emulating the developmental ... More
    C/EBP homologous protein-induced macrophage apoptosis protects mice from steatohepatitis.
    Authors:Malhi H, Kropp EM, Clavo VF, Kobrossi CR, Han J, Mauer AS, Yong J, Kaufman RJ,
    Journal:
    PubMed ID:23720735
    Nonalcoholic fatty liver disease is a heterogeneous disorder characterized by liver steatosis; inflammation and fibrosis are features of the progressive form nonalcoholic steatohepatitis. The endoplasmic reticulum stress response is postulated to play a role in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis. In particular, C/EBP homologous protein ... More
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