Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 488 Protein Synthesis Assay Kit

Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 488タンパク質合成アッセイキットは、蛍光顕微鏡またはハイコンテントイメージングを用いたタンパク質合成の検出に、高速、高感度、非放射性の方法を提供します。このアッセイでは、完全なメチオニン含有培地中の新たに翻訳されたタンパク質に、O-プロパリン-ピュロマイシン（OPP）が効率的に取り込まれ、迅速で特異性が高く穏やかなクリック反応で明るく光安定性の高いAlexa Fluor™色素で蛍光標識されます。

キットには以下のような特徴があります。

•培地の変更は不要—完全なメチオニン含有培地では、細胞培地の除去が不要
• マルチプレックス対応—Click-iT™プラス技術は、GFP、および蛍光コンジュゲートファロイジンの結合からのシグナルを保持
• 非放射性—従来の³⁵S-メチオニン法の代替
• in vivo作業—公開済み結果は、タンパク質翻訳の測定で、in vivoでの使用を実証

このキットには、ピューロマイシンのアルキンアナログ（別売もあり）であるO-プロパリン-ピュロマイシン（OPP）、Alexa Fluor™ 488ピコリルアジド、およびクリック反応を実行するために必要なすべての試薬が含まれています。OPPは培養細胞に供給され、活性タンパク質合成中にタンパク質に取り込まれます。Alexa Fluor™ 488ピコリルアジドとクリック反応試薬を添加すると、ピコリルアジド色素とOPPアルキルインの間に化学選択的ライゲーションまたは「クリック」反応が生じ、画像ベースの分析により修飾タンパク質を検出できます。

クリック反応では、生体直交（生物学的に独自な）部分を使用して、蛍光標識増殖細胞を標識し、低いバックグラウンドと高い検出感度を実現します。反応条件が穏やかなため、Click-iT™プラスアッセイはタンパク質翻訳イベントを検出し、細胞形態の保存、蛍光標識ファロイジンの結合、およびGFPからの蛍光シグナルを可能にします。

従来の方法で使用されていた³⁵Sメチオニンと異なり、OPPはアミノ酸アナログではないため、完全な培地で細胞に直接添加したり、in vivoでのタンパク質合成の決定に使用することができます。

このキットには、接着細胞サンプル中の新たに翻訳されたタンパク質中の、取り込まれたOPPの標識および検出に必要なすべての成分が含まれています。このキットには、検査ごとに1 mLの反応バッファーを使用して25個の18 mm × 18 mmのカバースリップを標識するのに十分な試薬が含まれています。