CellLight™ Nucleus-GFP, BacMam 2.0
CellLight™ Nucleus-GFP, BacMam 2.0
Invitrogen™

CellLight™ Nucleus-GFP, BacMam 2.0

CellLight™核-GFP、BacMam 2.0は、生細胞中の緑色蛍光タンパク質(GFP)で核を標識する簡単な方法を提供します。試薬を細胞に添加し、一晩インキュベートするだけで、翌朝にはイメージングの準備が整います。他の細胞構造をラベリングするには?CellLight™蛍光タンパク質ラベリングツールの詳細はこちらこのすぐに使用可能なコンストラクトをBacMam詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
C106021バイアル
製品番号(カタログ番号) C10602
価格(JPY)
52,000
Each
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数量:
1バイアル
CellLight™核-GFP、BacMam 2.0は、生細胞中の緑色蛍光タンパク質(GFP)で核を標識する簡単な方法を提供します。試薬を細胞に添加し、一晩インキュベートするだけで、翌朝にはイメージングの準備が整います。

他の細胞構造をラベリングするには?CellLight™蛍光タンパク質ラベリングツールの詳細はこちら

このすぐに使用可能なコンストラクトをBacMam 2.0テクノロジーを用いて細胞に導入し、GFPのSV40核局在化配列への融合を発現させます。挿入剤に関連する細胞毒性のない状態で、生細胞における核-GFPの挙動を観察し、複数のトラッキング色素またはトレーシング色素を使用して動的細胞プロセスをイメージングできます。

CellLight™コンストラクトを発現する細胞をホルムアルデヒドで固定し、免疫細胞化学技術を用いたマルチプレックスイメージングを行うこともできます。

CellLight™テクノロジーとは:
迅速で便利:CellLight試薬™を細胞に添加し、アッセイに対応した凍結細胞を一晩インキュベートし、イメージング—または保存するだけで、後で使用できるようになります。
高効率:初代細胞、幹細胞、神経細胞など、さまざまな哺乳類細胞株の最大90%の形質導入。
柔軟性:マルチプレックス実験や共局在研究向けに複数のBacMam試薬を共輸送。線量を簡単に変化させることで、発現レベルを厳密に制御します。
低毒性:CellLight™試薬は哺乳類細胞では複製されず、バイオセーフティレベル(BSL)1の取り扱いに適しています。

BacMamテクノロジー
CellLight™核-GFP、BacMam 2.0は、SV40核局在化配列とemGFPの融合コンストラクトで、細胞の核-GFPを正確かつ特異的に標的にします。この融合コンストラクトは昆虫ウイルスであるバキュロウイルスにパッケージされており、ヒト細胞では再現されず、ほとんどのラボで生物学的安全レベル(BSL)1で使用することが安全であると指定されています。BacMam技術により、ほとんどの哺乳類細胞タイプが、高効率かつ最小限の毒性で形質導入およびトランスフェクションされます。この一過性トランスフェクションは、一晩のインキュベーション後に最大5日間検出できます—ほとんどの動的細胞分析を実行するのに十分な期間です。あらゆるトランスフェクションおよび形質導入技術と同様に、BacMam法はすべての細胞を同等の効率でトランスフェクション/形質導入しないため、細胞集団研究または自動イメージングおよび自動カウントにはあまり適していません。CellLight™試薬は、細胞または細胞内の共局方化が必要な実験や、特別な分解能を必要とする細胞機能研究に最適です。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
Green
検出法蛍光
染色剤タイプGFP(EmGFP)
発光可視
励起波長域488⁄510
使用対象 (装置)共焦点顕微鏡, 蛍光顕微鏡
形状液体
製品ラインCellLight
数量1バイアル
出荷条件湿氷
技術蛍光強度
標識タイプ蛍光タンパク質
製品タイプ
SubCellular Localization
Unit SizeEach
組成および保存条件
2°C∼6°Cで保管し、遮光してください。冷凍しないでください。

よくあるご質問(FAQ)

CellLight や Premo FUCCI cell cycle sensor などの BacMam 2.0試薬にて、どのようにすれば形質転換効率を上げることができますか?

様々な濃度 (particle-to-cell ratio (PPC))、インキュベーション時の容量、温度、時間、細胞密度を検討してください。 接着細胞の場合、70%程度のコンフレンシーを推奨します。 PPCを調整後、容量が次の重要なパラメーターとなります。 もしそれでもうまくいかない時、BacMam Enhancer Kit (Cat. No. B10107) で効率を上げることもできます。

細胞をタイムラプス観察する時に 核を染色したい。 この目的でDAPIは使用できますか?

お勧めしません。DAPIのような核染色試薬は、DNAの機能に影響する可能性があるため、エンドポイントの染色にのみ使用すべきです。 また、徐々に解離していきます。 もし哺乳動物細胞をご使用の場合、CellLight® Nuclear CFP, GFP, RFP の利用をお薦めします。 これらを添加し、一晩インキュベートすれば、翌日には核が蛍光染色されます。 この染色は 3~5日間維持され、細胞の機能にも影響しません。 細胞質を染色するのでもよければ、CellTracker のような試薬も有用かもしれません。

How can I increase the transduction efficiency with the BacMam 2.0 reagents such as the the CellLight and Premo products?

Try varying particle-to-cell ratio (PPC), incubation volume, temperature and, cell density (if adherent cells are transduced). For adherent cells, we recommend a confluence of about 70%. Following the PPC, adjusting the volume is the next best parameter to change to optimize protein expression. If that doesn't work, you can also use the BacMam Enhancer Kit (Cat. No. B10107).

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Is there any way to preserve the CellLights labeling beyond 5 days?

Cells transduced with the CellLights reagents can be stored frozen for several months after transduction, without loss of expression.

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Are the CellLights products toxic to cells?

If the viral particles are used at the level we recommend, they are very well tolerated by cells.

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引用および参考文献 (9)

引用および参考文献
Abstract
Fractional proliferation: a method to deconvolve cell population dynamics from single-cell data.
Authors:Tyson DR, Garbett SP, Frick PL, Quaranta V,
Journal:Nat Methods
PubMed ID:22886092
'We present an integrated method that uses extended time-lapse automated imaging to quantify the dynamics of cell proliferation. Cell counts are fit with a quiescence-growth model that estimates rates of cell division, entry into quiescence and death. The model is constrained with rates extracted experimentally from the behavior of tracked ... More
Analysis of nucleocytoplasmic transport using green fluorescent protein.
Authors:Stauber RH,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:12136753
A hallmark of eukaryotic cells is their spatial and functional separation into the nucleus and the cytoplasm by the nuclear envelope. Although this separation introduces a potent and sophisticated level of regulation, it also requires highly effective and selective transport machinery. ... More
Functional Screening Assays with Neurons Generated from Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Stem Cells.
Authors:Efthymiou A, Shaltouki A, Steiner JP, Jha B, Heman-Ackah SM, Swistowski A, Zeng X, Rao MS, Malik N,
Journal:
PubMed ID:24019252
Rapid and effective drug discovery for neurodegenerative disease is currently impeded by an inability to source primary neural cells for high-throughput and phenotypic screens. This limitation can be addressed through the use of pluripotent stem cells (PSCs), which can be derived from patient-specific samples and differentiated to neural cells for ... More
Modulation of nucleocytoplasmic trafficking by retention in cytoplasm or nucleus.
Authors:Roth DM, Harper I, Pouton CW, Jans DA,
Journal:J Cell Biochem
PubMed ID:19507231
Nuclear protein transport processes have largely been studied using in vitro semi-intact cell systems where high concentrations of nuclear localizing substrates are used, and cytoplasmic components such as the microtubule (MT) network, are either absent or damaged. Here we use the fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) technique to analyze the ... More
Assessment of GFP expression and viability using the tali image-based cytometer.
Authors:Remple K, Stone L,
Journal:J Vis Exp
PubMed ID:22127256
Single-cell and population information are commonly obtained either by flow cytometry or fluorescence microscopy. However, these two methods provide different information. Flow cytometry gives quantitative multi-parametric information about physical characteristics and staining or expression, but doesn't allow for visualization. Stand-alone fluorescence microscopy provides visual data, but doesn't allow for straightforward ... More