Click-iT™ Plus TUNEL Assay Kits for In Situ Apoptosis Detection
Click-iT™ Plus TUNEL Assay Kits for In Situ Apoptosis Detection
Invitrogen™

Click-iT™ Plus TUNEL Assay Kits for In Situ Apoptosis Detection

Green features
Click-iT Plus TUNELアッセイキットは、細胞および組織サンプル中のアポトーシスを検出します。これにより、容易な色素結合を実現し、GFPおよびRFPによるマルチプレックス化を可能にします。
製品番号(カタログ番号)標識または色素
C10617GreenAlexa Fluor™ 488
C10618RedAlexa Fluor™ 594
C10619遠赤色Alexa Fluor™ 647
製品番号(カタログ番号) C10617
価格(JPY)
135,700
Each
お問い合わせください ›
色:
Green
標識または色素:
Alexa Fluor™ 488

In Situアポトーシス検出用Click-iT Plus TUNELアッセイではAlexa Fluor 488、594、および647蛍光色素オプションが利用できるため、組織および培養細胞サンプル中のアポトーシス細胞をより多く検出できます。このin situアポトーシス検出キットは組織または細胞サンプル用に最適化されており、これらの色素はGFPやRFPなど他の色素やタンパク質とのマルチプレックス化が可能であり、より小さなサイズ(抗体と比較した場合)のため複雑な分子に容易に組み込むことができます。このTUNELアッセイキットは、非常に柔軟性が高く、1回の実験で1∼50サンプルを検査する場合に使用できます。

in situアポトーシス検出用のClick-iT Plus TUNEL Alexa Fluor 488、594、および647アッセイは、小、高特異性標識の部分と明るい蛍光色素を組み合わせることで、組織および培養細胞サンプル中のアポトーシス細胞の検出を可能にします。標識の部分をDNA断片に組み込んだ後、GFPまたはRFPから放出される蛍光シグナルを保存するために十分な穏やかな条件を用いて、触媒的な「クリック」反応により検出を行います。

Click-iT Plus TUNEL Assay for In Situ Apoptosis Detectionでは、さらに以下の利点が得られます:
• 組織サンプルまたは細胞サンプル中のアポトーシス細胞の検出に最適化
• マルチプレックスにより、GFPやRFPなどの蛍光色素や蛍光タンパク質との併用に最適化
• 改良されたTUNEL Assay—反応部位が小さいため、ラベルの取り込みが容易
•明るいアポトーシス性シグナル—Alexa Fluor色素により、反応性の強い明るい光標識が小さく、安定した非光退色蛍光シグナル
• 柔軟性—一度に1~50サンプルを検査するようアッセイを構成

細胞DNAの断片化がアポトーシスの特徴。TUNELアッセイは、アポトーシス細胞中または組織サンプルの断片化DNAを検出するためにもっとも広く使用されている方法です。TUNELアッセイは、断片化されたDNAの3’-OH末端に修飾dUTPを組み込むことから始まります。dUTP修飾は多くの場合、蛍光色素分子の付加であることが多いです。蛍光色素分子サイズにより、修飾dUTPは予想される取り込み速度よりも低く表示されることがあり、これがTUNELアッセイ感度に影響を与える可能性があります。さらに、現在市販されているTUNELアッセイキット向け蛍光色素の多くには、光退色や蛍光スペクトルのオーバーラップの問題があり、いずれもアッセイの感度と多重化能力を低下させます。

Click-iT Plus TUNELアッセイは、こうした問題を解消するために開発されました。このアッセイでは、ヌクレオチドがより容易に取り込まれるようにするアルキン基(小さな生体直交性官能基)で修飾されたdUTPを使用します。取り込み後、アルキン基とAlexa Fluorピコリルアジド蛍光色素の間で高度に特異的なクリック反応が起こり、その後にその色素が検出されます。これにより、アポトーシス細胞を検出するための高感度かつ特異的なアッセイが可能となります。Click-iT Plus TUNELアッセイは反応条件が穏やかなため、蛍光タンパク質または色素によるマルチプレックスを可能にします。

Click-iT Plus TUNELアッセイは、さまざまなホルマリン固定パラフィン包埋組織タイプでバリデーション済みです。いずれの場合も、蛍光タンパク質および蛍光色素でのマルチプレックス能力が保持されていました。さらに、蛍光標識ファロイジンを使用してアクチンを染色する能力も保持されました。

Click-iT Plus TUNELアッセイには、組織サンプルまたは細胞サンプルからアポトーシス細胞を検出するために必要なすべての試薬が含まれています。このキットに含まれる試薬は、50サンプルの検査に使用でき、一度に1~50サンプルの検査を行うように構成できます。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
仕様
Green
概要Click-iT Plus TUNEL Assay for In Situ Apoptosis Detection、Alexa Fluor™ 488色素
励起/発光490/525
使用対象 (装置)蛍光顕微鏡
グリーン機能危険性が低い
標識タイプAlexa Fluor™色素
標識または色素Alexa Fluor™ 488
反応数50個のカバースリップ
製品ラインClick-iT
製品タイプTUNELアッセイ
数量1 kit
出荷条件ドライアイス
保存要件≤20℃で保存し、遮光してください。
検出法蛍光
フォーマットカバースリップ
Unit SizeEach

よくあるご質問(FAQ)

固定・透過処理したサンプルでアポトーシスの確認をしたい。 どの試薬がおすすめか? 蛍光標識 Annexin V は使用できるか?

固定後のサンプルでの Annexin V の使用はお勧めできません。 ホルムアルデヒドによる架橋により、ホスファチジルセリンもマスクされる可能性があるためです。 固定後のサンプルで使用できるアポトーシス検出方法は、anti-Caspase抗体を用いた免疫染色、もしくは、 Click-iT® TUNEL Imaging Kit などの TUNEL法です。

What is the excitation/emission maxima of the Alexa Fluor 488 dye?

Alexa Fluor 488 has fluorescence excitation and emission maxima of 495/519 nm.

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I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

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I need to test cells for apoptosis after they have been formaldehyde-fixed and permeabilized. What dye or conjugate do you recommend? Will Annexin V conjugates work?

We do not recommend Annexin V for post-fix labeling, since fixation inactivates the function of the translocase; fixed samples would show mostly uniform labeling with Annexin V. The only options you have for apoptosis assays after fixation are to use an anti-caspase antibody or perform a TUNEL assay, such as with the Click-iT TUNEL Imaging kits.

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Can I use Click-iT TUNEL Alexa Fluor Imaging Assays for Microscopy & HCS (Cat. No. C10246) for flow cytometry?

We have not validated the use of Click‐iT TUNEL assay for flow cytometry. Theoretically, any Click‐iT TUNEL assay for imaging can be adapted to be used with flow cytometry. In general, follow the protocol as provided but spin down the suspension cells after every step. Start with about 10∧6 cells at about 10∧7 cell/mL. Please note that flow cytometry is more sensitive than fluorescence imaging, so you should use between 1/5th to 1/10th of the azide dye detection reagent in the click reaction. All other concentrations of the click reaction reagents should stay the same. We recommend using the Click‐iT Plus TUNEL assays (C10617, C10618, C10619), as the detection reagent is provided in a separate vial, enabling you to modify the concentration used. The Click‐iT Plus TUNEL assay protocol can be found on the following link.

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引用および参考文献 (9)

引用および参考文献
Abstract
Signaling and physiological activity of the NO-donating agent TNICthio in human blood lymphocytes, Jurkat and MCF7 cell lines.
Authors:Vasilieva SV, Petrishcheva MS, Yashkina EI, Osipov AN
Journal:Mol Biol Rep
PubMed ID:30637625
'Signaling and physiological activities of the crystalline tetranitrosyl iron complex with thiosulfate-a NO-donor (TNICthio) were first studied on human cells in conditions of mono and combined application of H' ... More
Characterization of NvLWamide-like neurons reveals stereotypy in Nematostella nerve net development.
Authors:Havrilak JA, Faltine-Gonzalez D, Wen Y, Fodera D, Simpson AC, Magie CR, Layden MJ
Journal:Dev Biol
PubMed ID:28888696
The organization of cnidarian nerve nets is traditionally described as diffuse with randomly arranged neurites that show minimal reproducibility between animals. However, most observations of nerve nets are conducted using cross-reactive antibodies that broadly label neurons, which potentially masks stereotyped patterns produced by individual neuronal subtypes. Additionally, many cnidarians species ... More
The Antidiabetic Drug Lobeglitazone Protects Mice From Lipogenesis-Induced Liver Injury via Mechanistic Target of Rapamycin Complex 1 Inhibition.
Authors:Lee YS, Park JS, Lee DH, Lee DK, Kwon SW, Lee BW, Bae SH
Journal:Front Endocrinol (Lausanne)
PubMed ID:30298052
Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a metabolic disorder closely linked with type II diabetes (T2D). The progression of NAFLD is associated with the induction of lipogenesis through hyperactivation of the mechanistic target of rapamycin complex 1 (mTORC1) pathway. An increase in lipogenesis induces endoplasmic reticulum (ER) stress and accelerates ... More
Inhibition of WNT7A-ß-catenin signaling pathway sensitizes oral squamous cell carcinoma to cisplatin.
Authors:Tian J, Cui X, Feng Y, Gu L
Journal:Int J Clin Exp Pathol
PubMed ID:31949568
Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common type and most threatening head and neck cancer worldwide. Here, we aim to study the relationship between the WNT7A-ß-Catenin signaling pathway and the chemotherapy resistance of OSCC patients. We analyzed 42 OSCC patients and 19 adjacent non-tumor tissues, evaluated the expression ... More
Small Molecule GSK-J1 Affects Differentiation of Specific Neuronal Subtypes in Developing Rat Retina.
Authors:Raeisossadati R, Móvio MI, Walter LT, Takada SH, Del Debbio CB, Kihara AH
Journal:Mol Neurobiol
PubMed ID:29981055
Histone post-translational modification has been shown to play a pivotal role in regulating gene expression and fate determination during the development of the central nervous system. Application of pharmacological blockers that control histone methylation status has been considered a promising avenue to control abnormal developmental processes and diseases as well. ... More