Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 488フローサイトメトリーアッセイキットは、従来のBrdU法と比較して、増殖細胞のDNA複製を分析するための、シンプルで堅牢なアッセイを提供します。新たに合成されたDNAは、フローサイトメーターの488 nmレーザーを使用して分析されます。Click-iT™ Plusの組成は、R-PEやR-PEタンデムなどの標準的なフルオロフォアや蛍光タンパク質に対応しています。

•マルチプレックス化可能—R-PE（およびタンデム）および蛍光タンパク質に対応
•正確—BrdUアッセイと比較して優位な結果
•高速—わずか60分

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マルチプレックス化可能
Click-iT™ の組成は、オリジナルのClick-iT™ EdUフローサイトメトリーアッセイと比べてマルチプレックス性が向上しています。Click-iT™ Plus EdUアッセイは、オリジナルのClick-iT™ EdUアッセイの精度や速度を損なうことなく、R-PEおよびR-PEタンデム、ならびにGFPやmCherryなどの蛍光タンパク質と組み合わせて使用できます。

BrdUよりも優れた結果をもたらす高度な方法
増殖分析の最も正確な方法はDNA合成の直接測定です。これは当初、放射性ヌクレオシドの組み込みによって行われていました。この方法は、ヌクレオシドアナログブロモデオキシウリジン（BrdU）の抗体ベースの検出に置き換えられました。Click-iT™ Plus EdUフローサイトメトリーアッセイは、BrdUアッセイの新たな代替品です。EdU（5-エチニル-2´-デオキシウリジン）は、活性DNAの合成中にDNAに取り込まれるチミジンアナログです。検出は、クリックケミストリーに基づいています。クリックケミストリーは、アジドとアルキンの間の銅触媒共有結合反応です。このアプリケーションでは、アルキンはEdUのエチニル基に、アジドはAlexa™ Fluor色素に結合しています。標準的なフローサイトメトリー法は、集団におけるS相細胞の割合を測定するために使用されます。

穏やかな条件では細胞周期色素と抗体を使用できる
少量の色素アジドを使用することで、穏やかな条件で統合されたEdUを効率的に検出できます。一方、標準的なアルデヒドベースの固定および界面活性剤透過化では、Click-iT™ Plus検出試薬でDNAにアクセスできます。これは、抗BrdU抗体で検出できるようにBrdUを露出させるために（HCl、熱、またはDNaseでの消化を使用して）DNAの変性を必要とするBrdUアッセイとは対照的です。BrdUアッセイのサンプル処理は、HCl法を使用する際に、細胞周期分布のシグナル変化や抗原認識部位の破壊を引き起こす可能性があります。対照的に、使いやすいClick-iT™ Plus EdUアッセイは、細胞周期色素に対応しています。Click-iT™ Plus EdUアッセイは、表面および細胞内マーカーに対する抗体、およびR-PE、R-PEタンデム、蛍光タンパク質（GFPおよびmCherry）などの標準蛍光色素で標識されたコンジュゲートでマルチプレックス化することもできます。

迅速かつシンプルなプロトコル
Click-iT™ Plus EdUプロトコルは、免疫組織化学抗体標識のアルデヒド固定および界面活性剤透過化ステップに基づいています。ただし、EdUはサポニンやメタノールなどの他の固定／透過処理剤に対応しています。’わずか5ステップで細胞増殖データを解析できます。

1.EdUで細胞を処理します。
2.細胞を固定し透過します。
3.Click-iT™ Plus検出カクテルを使用して30分間、S相細胞を検出します。
4.1回洗浄します。
5分析します。

状況によっては、わずか60分で結果を確認できますが、すべてのアプリケーションに90分を推奨します。