One Shot™ BL21-AI™ Chemically Competent E. coli

One Shot™ BL21-AI™ Chemically Competent <i>E. coli</i>

Citations & References (9)

Invitrogen™

One Shot™ BL21-AI™ Chemically Competent E. coli

One Shot™ BL21-AI™大腸菌は、T7プロモーターベースの発現システムからの毒性タンパク質の厳密な制御と強力な発現を必要とする用途用に設計されたケミカルコンピテント細胞です。One Shot™ BL21-AI™ケミカルコンピテント細胞の形質転換効率は、>1×108 cfu／µgプラスミドDNAです。•毒性タンパク質の発現誘導に最適•遺伝子発現は詳細を見る

製品番号（カタログ番号）	数量
C607003	20x50 μL

製品番号（カタログ番号） C607003

価格（JPY）

106,000

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20x50 μL

One Shot™ BL21-AI™大腸菌は、T7プロモーターベースの発現システムからの毒性タンパク質の厳密な制御と強力な発現を必要とする用途用に設計されたケミカルコンピテント細胞です。One Shot™ BL21-AI™ケミカルコンピテント細胞の形質転換効率は、>1×10⁸ cfu／µgプラスミドDNAです。
•毒性タンパク質の発現誘導に最適
•遺伝子発現は、培養にL-アラビノースを添加することによって調節されます。
•あらゆるT7プロモーターベースプラスミドでの使用に適しています。
• 便利なワンショット™フォーマットで提供されています。

毒性組換えタンパク質の優れた発現
One Shot™ BL21-AI™大腸菌には、T7 RNAポリメラーゼ（T7RNAP）をaraBADオペロンのaraBローカスにエンコードし、T7 RNAPの調節をアラビノース誘導性araBADプロモーターの制御下に置く遺伝子の染色体挿入が含まれています（1）。したがってこの菌株は、T7 RNAPの基礎発現が漏れ易い他のBL21株に対して毒性を持つ可能性のある遺伝子の発現に特に有用です。BL21-AI™株にはIonプロテアーゼが含まれておらず、外膜プロテアーゼOmpTが欠損しています。この遺伝子型は、この菌株で発現される異種タンパク質の分解を低減します。最後に、BL21-AI™から得られる組み換えタンパク質の収量は、一般的に他のBL21株から得られる収量と同等です。

遺伝子型：
F^-ompT hsdS_B（ r_B^- m_B^-） gal dcm araB::T7RNAP-tetA

使い易いシングルチューブフォーマット
シングルチューブ、シングルユースフォーマットではすべての形質変換ステップを同じチューブで行うことができるため、時間を節約して汚染を防止することができます。

お客様が必要とする菌株とフォーマットを見つけ出してください。
当社は、お客様固有の形質転換ニーズを満たすために、他の多くの異なる菌株とケミカルコンピテント細胞およびエレクトロコンピテント細胞のフォーマットも提供しています。非毒性の組換えタンパク質の発現には、One Shot™ BL21 Star™（DE3）ケミカルコンピテント細胞またはOne Shot™ BL21 Star™（DE3） pLysSケミカルコンピテント細胞をお選びください。

研究用途にのみご使用ください。動物やヒトの診断や治療には使用できません。

研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。

抗生物質耐性菌Yes (Tetracycline)

青／白スクリーニング不可

メチル化DNAのクローニング不可

F'エピソームを含むF’エピソームが欠落しています

高スループット適合性ハイスループット非対応（手動）

プラスミドの品質を向上不可

Improves Protein StabilityYes (lon, ompT)

Improves RNA StabilityNo

非メチル化DNAの調製Yes (dcm)

製品ラインOne Shot

製品タイプコンピテントセル

数量20x50 μL

組換えを抑制不可

出荷条件Dry Ice

T1ファージ－耐性（tonA）不可

Toxic ProteinsYes (araB)

形質転換効率レベル中効率 (10^8-10^9 cfu⁄µg)

フォーマットOne Shot

プロモーターT7

種E. coli

Unit SizeEach

組成および保存条件

BL21-AI™ケミカルコンピテント大腸菌は、S.O.C.培地およびスーパーコイル制御プラスミドを用いたシングルユースの50µLアリコートで提供されています。コンピテントセルを-80℃で保存します。すべてのコンポーネントは、適切に保存した場合、6カ月間安定しています。

よくあるご質問（FAQ）

アラビノース誘導発現に使用できる大腸菌は?

LMG194, TOP10, TOP10F"など、L-アラビノースを取り込めるが代謝できない株が使用できます。DH5αは使えません。

アラビノース誘導発現における、TOP10に対するLMG194の利点は?

TOP10に対するLMG194の利点は、最小培地(RM培地, M9培地は不可)で培養できることです。それにより、誘導制御をより厳密に行える可能性があります。

My gene of interest is toxic to bacterial cells. Are there any precautions you can suggest?

Several precautions may be taken to prevent problems resulting from basal level expression of a toxic gene of interest. These methods all assume that the T7-based or Champion-based expression plasmid has been correctly designed and created.

- Propagate and maintain your expression plasmid in a strain that does not contain T7 RNA polymerase (i.e., DH5α).
- If using BL21 (DE3) cells, try growing cells at room temperature rather than 37 degrees C for 24-48 hr.
- Perform a fresh transformation using a tightly regulated E. coli strain, such as BL21-AI cells.
- After following the transformation protocol, plate the transformation reaction on LB plates containing 100 µg/mL ampicillin and 0.1% glucose. The presence of glucose represses basal expression of T7 RNA polymerase.
- Following transformation of BL21-AI cells, pick 3 or 4 transformants and inoculate directly into fresh LB medium containing 100 µg/mL ampicillin or 50 µg/mL carbenicillin (and 0.1% glucose, if desired). When the culture reaches an OD600 of 0.4, induce expression of the recombinant protein by adding L-arabinose to a final concentration of 0.2%.
- When performing expression experiments, supplement the growth medium with 0.1% glucose in addition to 0.2% arabinose.
- Try a regulated bacterial expression system such as our pBAD system.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

I'm trying to express my protein using a bacterial expression system. How do I know if I'm seeing degradation of my protein or if what I’m seeing is codon usage bias?

Typically, if you see 1-2 dominant bands, translation stopped prematurely due to codon usage bias. With degradation, you usually see a ladder of bands. With degradation, you can try using a protease inhibitor and add it to the lysis buffer to help prevent degradation. If degradation is the issue, a time point experiment can be done to determine the best time to harvest the cells.

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I'm trying to express my protein using a bacterial expression system and am getting inclusion bodies. What should I do?

If you are having a solubility issue, try to decrease the temperature or decrease the amount of IPTG used for induction. You can also try a different, more stringent cell strain for expression. Adding 1% glucose to the bacterial culture medium during expression can also help.

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引用および参考文献 (9)

引用および参考文献

Abstract

A multipurpose vector system for the screening of libraries in bacteria, insect and mammalian cells and expression in vivo.

Authors:Laitinen OH, Airenne KJ, HytÃ¶nen VP, Peltomaa E, MÃ¤hÃ¶nen AJ, Wirth T, Lind MM, MÃ¤kelÃ¤ KA, Toivanen PI, Schenkwein D, Heikura T, Nordlund HR, Kulomaa MS, YlÃ¤-Herttuala S,

Journal:Nucleic Acids Res

PubMed ID:15731335

We have constructed a novel tetra-promoter vector (pBVboostFG) system that enables screening of gene/cDNA libraries for functional genomic studies. The vector enables an all-in-one strategy for gene expression in mammalian, bacterial and insect cells and is also suitable for direct use in vivo. Virus preparation is based on an improved mini Tn7 transpositional ... More

Tomato aromatic amino acid decarboxylases participate in synthesis of the flavor volatiles 2-phenylethanol and 2-phenylacetaldehyde.

Authors:Tieman D, Taylor M, Schauer N, Fernie AR, Hanson AD, Klee HJ,

Journal:Proc Natl Acad Sci U S A

PubMed ID:16698923

'An important phenylalanine-derived volatile compound produced by plants is 2-phenylethanol. It is a major contributor to flavor in many foods, including fresh fruits, such as tomato, and an insect-attracting scent in roses and many other flowers. Despite the centrality of 2-phenylethanol to flavor and fragrance, the plant genes responsible for ... More

Identification of an antiangiogenic FGF2-binding site in the N terminus of the soluble pattern recognition receptor PTX3.

Authors:Camozzi M, Rusnati M, Bugatti A, Bottazzi B, Mantovani A, Bastone A, Inforzato A, Vincenti S, Bracci L, Mastroianni D, Presta M,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:16769728

'Long-pentraxin 3 (PTX3) is a soluble pattern recognition receptor with non-redundant functions in inflammation and innate immunity. PTX3 comprises a pentraxin-like C-terminal domain involved in complement activation via C1q interaction and an N-terminal extension with unknown functions. PTX3 binds fibroblast growth factor-2 (FGF2), inhibiting its pro-angiogenic and pro-restenotic activity. Here, ... More

Domain structure and DNA binding regions of beta protein from bacteriophage lambda.

Authors:Wu Z, Xing X, Bohl CE, Wisler JW, Dalton JT, Bell CE,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:16820360

beta protein from bacteriophage lambda promotes a single-strand annealing reaction that is central to Red-mediated recombination at double-strand DNA breaks and chromosomal ends. beta protein binds most tightly to an intermediate of annealing formed by the sequential addition of two complementary oligonucleotides. Here we have characterized the domain structure of ... More

Proteolytic processing of sapovirus ORF1 polyprotein.

Authors:Oka T, Katayama K, Ogawa S, Hansman GS, Kageyama T, Ushijima H, Miyamura T, Takeda N,

Journal:J Virol

PubMed ID:15919882

The genome of Sapovirus (SaV), a causative agent of gastroenteritis in humans and swine, contains either two or three open reading frames (ORFs). Functional motifs characteristic to the 2C-like NTPase (NTPase), VPg, 3C-like protease (Pro), 3D-like RNA-dependent RNA polymerase (Pol), and capsid protein (VP1) are encoded in the ORF1 polyprotein, ... More

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