5(6)-SFX (6-(Fluorescein-5-(and-6)-Carboxamido) Hexanoic Acid, Succinimidyl Ester), mixed isomers

フルオレセインは広く使用されている緑色蛍光誘導体化試薬ですが、スクシンイミジルエステルは、多くの場合、タンパク質やアミン修飾オリゴヌクレオチドをはじめとするアミン含有分子の一級アミン（R-NH₂）の標識化に使用されます。このSFXスクシンイミジルエステルには、蛍光色素分子と反応基の間に7原子のアミノヘキサノイルスペーサーが存在します。このスペーサーによって、蛍光色素分子が標識対象の生体分子から分離します。これにより、標識時に発生することが多い消光を低減できる可能性があります。生成されたフルオレセインコンジュゲートは、標準的なFITCフィルターセットまたはGFPフィルターセットで検出できます。フルオレセインベースの色素とそのコンジュゲートは、比較的高い光退色率とpH依存性の蛍光を示します。Alexa Fluor™ 488およびOregon Green™ 488はフルオレセインの代替色素です。フルオレセインに類似のスペクトルと、生理学的な範囲のpHにほとんど依存しない光安定性を有しています。

仕様：

• 蛍光色素分子標識：フルオレセイン

• 反応基：スクシンイミジルエステル

• 反応性：タンパク質とリガンド、アミン修飾オリゴヌクレオチドの一級アミン

• 分子量：586

• 吸光係数：74,000 cm^-1M^-1

• コンジュゲートのEx/EM ：494/520 nm

• スペクトルが類似した色素：Alexa Fluor™ 488、GFP

一般的な標識反応

アミン反応性試薬は、実質的にあらゆるタンパク質またはペプチドを標識でき、用意されているプロトコルはIgG抗体向けに最適化されています。任意の量のタンパク質に合わせて反応規模を調整できますが、最適な結果を得るにはタンパク質の濃度を2 mg/mL以上にする必要があります。タンパク質に対する反応性試薬のモル比を3種類使用して、程度が異なる3種類の標識化を試すことをお勧めします。

一般的には、フルオレセインスクシンイミジルエステルを、高品質で無水のジメチルホルムアミド（DMF）またはジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解し、室温環境下でpHを8.3とした0.1～0.2 Mの重炭酸水素ナトリウムバッファー中で1時間の反応を実施します。末端アミンのpKaはリジンεアミノ基よりも低いため、pHが中性に近いバッファーを使用してアミン末端のより選択的な標識化を実現できます。

コンジュゲート精製

多くの場合、Sephadex™ G-12、Biogel™ P-30、それらの同等品などのゲルろ過カラムを使用して、標識化した抗体を遊離色素から分離します。タンパク質のサイズが十分に大きい場合や十分に小さい場合は、分子量のカットオフが適切なゲルろ過媒体を選択するか、透析による精製を実施します。

代替パッケージ

フルオレセインの混合異性体アミン反応性スクシンイミジルエステルには、10x1 mgのユニットサイズ（F6129）、単一異性体（F6106）、およびSFXスペーサーより親水性が高いスペーサーを備えたタイプ（F6130）が用意されています。また、タンパク質と核酸の標識化に使用する多数のキットにも、これらが付属しています（タンパク質と核酸の標識化向けの活性エステルと各種キット—表 1.2）。