Thermo Scientific Phusion部位特異的突然変異誘発キットは、あらゆるタイプのプラスミドDNAに点突然変異、挿入、または欠失を導入するための多用途で効率的なツールです。このキットがあれば、リン酸化プライマーを用いてプラスミド全体を増幅し、望ましい変異を導入することができます。望ましい変異を含む、増幅された線形PCR産物は、T4 DNAリガーゼを用いた5分間のライゲーション反応により環状化されます。得られたプラスミドは、コンピテント大腸菌セルに形質転換することができます。

Phusion DNAポリメラーゼの最適なアニーリング温度は、Taqベースのポリメラーゼの温度と大きく異なる場合があります。

最適な結果を得るには、まずTm計算機を使用してTmを正確に計算します。


特徴

•堅牢で信頼性の高い指数増幅法
•特別なベクター、制限部位、または標的プラスミドのメチル化状態などは必要ありません。
•別のステップで開始テンプレートを破棄する必要はありません
• 別のステップでPhusionホットスタートII High Fidelity DNAポリメラーゼのテンプレートを破棄する必要はありません不要な二次変異を最小限に抑えます
•10 kbまでのプラスミドの大幅な増幅
•ポリメラーゼのホットスタート改良は、PCRの最初のサイクルの前に非特異的産物の増幅とプライマーの望ましくない分解を防ぎます
•キットにはT4 DNAリガーゼが含まれています。ライゲーション前後の精製ステップはありません。
•コンピテント大腸菌セルのすべての株に適合します