このパッケージには、Phusion部位特異的変異導入キットと、このキットでの使用に最適化されたDH10Bコンピテントセルが含まれています

Phusion部位特異的変異導入キット
Thermo Scientific Phusion部位特異的変異導入キットは、あらゆる種類のプラスミドDNAに点突然変異や挿入・欠失を導入するために使用できる、多目的かつ効率的なツールです。このキットがあれば、リン酸化プライマーを用いてプラスミド全体を増幅し、望ましい変異を導入することができます。望ましい変異を含む、増幅された線形PCR産物は、T4 DNAリガーゼを用いた5分間のライゲーション反応により環状化されます。結果的に作成されたプラスミドは、以後、大腸菌細胞に転換できます。DH10Bコンピテントセルは、キットでの使用を推奨します。

Phusion DNAポリメラーゼの最適なアニーリング温度は、Taqベースのポリメラーゼと大きく異なる場合があります。最適な結果を得るには、まずTm計算ツールを使用してTmを正確に計算します。

•堅固かつ信頼性の高い指数関数的増幅メソッド
• ターゲットプラスミドには、特別なベクターや制限箇所、もしくはメチル化状態などは不要です
• 開始時のテンプレートを別個のステップで破壊する必要はありません
• PhusionホットスタートII高忠実性DNAポリメラーゼは、不要な二次的変異を最小限に抑えます
• 10 kbまでの大型プラスミドの増幅
• ポリメラーゼのホットスタート用の修飾は、非特異的プロダクトの増幅やPCRの最初のサイクルの開始前の、プライマーの望ましくない劣化を防ぎます
• キット内にはT4 DNAリガーゼが含まれます。ライゲーション前後に精製のステップは不要です

DH10Bコンピテントセル
Thermo Scientific DH10Bコンピテントセルは効率的なケミカルコンピテント大腸菌細胞です。DH10B株は、メチルシトシンとメチルアデニンを含むDNAのクローニングに適しており、原核生物と真核生物のゲノムDNAの両方を効率的にクローニングできます。これらの細胞は、プラスミド由来ベクターを使用したcDNAライブラリの構築に最適です。ジェノタイプ：F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG

•高い形質転換効率：>1x10⁹ cfu/μg pUC19 DNA
• ルーチンおよびハイスループットクローニング、突然変異生成用途に適しています
• 便利な1バイアル包装あたり2反応
• S.O.C.伸長培地が付属

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Thermo Scientific Phusion部位特異的変異導入キット（コンピテントセルなし）