Image-iT™ LIVE Red and Green Caspase Apoptosis Detection Kits for microscopy

蛍光顕微鏡やハイコンテントスクリーニング（HCS）などの顕微鏡用のImage-iT LIVE赤色／緑色ポリおよびカスパーゼ-3/-7アポトーシス検出キットを使用して、カスパーゼ活性化、膜透過性、および細胞周期を検出し、評価します。Image-iT LIVE赤色および緑色カスパーゼ検出キットでは、カスパーゼ活性を検出しデータ報告するために、細胞アポトーシスの測定法である蛍光性カスパーゼ阻害剤（FLICA）手法を用います。特にImage-iT LIVE赤色および緑色カスパーゼ検出キットには、ポリカスパーゼおよびカスパーゼ3/7検出用の基質SR-VAD-FMKおよびSR-DEVD-FMK（赤蛍光）、またはFAM-VAD-FMKおよびFAM-DEVD-FMK（緑蛍光）が含まれています。また、Hoechst 33342およびヨウ化プロピジウム染色も含まれており、顕微鏡およびHCSによる膜透過性と細胞周期の同時評価も可能です。

顕微鏡用Image-iT LIVE赤色および緑色カスパーゼ検出キットは、活性型カスパーゼの検出に新しいアプローチを採用しています：いずれのアッセイキットともアフィニティラベルである蛍光カスパーゼ阻害剤（FLICA）の手法がとられます。この試薬は、システインと共有結合反応するフルオロメチルケトン（FMK）部分を、カスパーゼ特異的なアミノ酸配列に関連付けます。さまざまなアミノ酸認識配列を使用して、次の異なるカスパーゼを検出します：ポリカスパーゼ（カスパーゼ-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9を含む）用のバリン-アラニン-アスパラギン酸（VAD）、およびカスパーゼ3/7用のアスパラギン酸グルタミン酸-バリン-アスパラギン酸（DEVD）。スルホダミン（SR）群またはカルボキシフルオレセイン（FAM）群がレポーターとして結合されます。

FLICA試薬は、認識配列を介して活性カスパーゼの酵素反応中心と相互作用し、FMK部分を介して共有結合すると考えられています。FLICA阻害剤は細胞透過性であり、細胞無毒性です。非結合FLICA分子は細胞外に拡散し、洗い流されます。残りの赤または緑色蛍光シグナルは、阻害剤が添加された時点で存在していた活性カスパーゼの量を直接表す指標となります。FLICA、ヨウ化プロピジウム、Hoechst 33342試薬の励起ピークおよび発光ピークの概算値は、それぞれ488 nm/530 nm、535 nm/6,617 nm、350 nm/461 nmです。Image-iT LIVE Red Poly Caspases、Red Caspase-3/7、Green Poly Caspases、Green Caspase-3/7検出キットに含まれる検出試薬は、それぞれSR-VAD-FMK、SR-DEVD-FMK、FAM-VAD-FMK、FAM-DEVD-FMKです。