Anza™ Alkaline Phosphatase

Invitrogen™ Anza™アルカリホスファターゼは、Anza™制限酵素消化後に残る3'および5'リン酸基の除去に使用することを目的としています。たとえば、ライゲーションのインサート前のベクターの脱リン酸化や、エンドラベリング前の5′リン酸の除去などに使用できます。DNAライゲーションには5′リン酸基が必要であるため、Anzaアルカリホスファターゼを用いたベクターの処理は自己ライゲーションと再サーキュレーター化を防止し、クローニング時のベクターのバックグラウンドを低下させます。

Anzaアルカリホスファターゼの特長：

•すべてのAnza制限酵素で使用できることを検証済み
• 37℃、15分で脱リン酸化
• 80℃で5分後に熱不活性化°
• Anzaバッファーで完全に活性化
• あらゆるタイプのDNA末端（平滑、5’-および3'-オーバーハング）を脱リン酸化

柔軟なプロトコル
一部の制限酵素では、消化と脱リン酸化が同時に行われた場合、脱リン酸化プロセスが禁止または抑制されます。そのため、使用する制限酵素に応じて、Anzaアルカリホスファターゼを次の3つの方法のいずれかで使用できます。

•ワンステッププロトコル：Anzaバッファーで制限酵素消化と脱リン酸化を同時に行う
• 熱不活性化の2ステッププロトコル：消化を最初に行い、続いて熱不活性化（80℃で20分）、最後に脱リン酸化を行う
• カラム精製の2ステッププロトコル：消化を最初に行い、続いてカラム精製、最後に脱リン酸化を行う

酵素の除去が不要
Anzaアルカリホスファターゼは80℃で5分後に完全に不活性化されるため、その後のライゲーションステップの前にフェノール／クロロホルム抽出またはカラム精製によって酵素を除去する必要はありません。ワンステッププロトコルを使用した場合は、反応混合液を80℃で20分間加熱し、制限酵素とアルカリホスファターゼを不活性化します。アルカリホスファターゼを熱不活性化すると、ライゲーションのために反応混合液に添加されたDNA断片が、残存するホスファターゼによって脱リン酸化されるのを防ぐことができます。

Anza™アルカリホスファターゼは、Anza™制限酵素クローニングシステムの一部で、従来のクローニングプロセスを統合しています。その他のAnza DNA修飾酵素には、Anza T4 DNAリガーゼマスターミックス、Anza T4 PNKキット、Anza DNA平滑末端キット、Anza DNA末端修復キットがあります。

Anzaシステムの詳細については、www.thermofisher.com/anzaをご覧ください。