Thermo ScientificシリカビーズDNAゲル抽出キットは、アガロースゲルや反応混合物から簡単かつ効率的にDNAを抽出するシステムです。このキットはVogelsteinおよびGillespieの改良プロトコルを利用しており、アガロースゲルの可溶化と、高塩濃度で特別に調製されたシリカ粒子での核酸の選択的吸着を使用します。DNAと結合したシリカ粒子を洗浄して汚染物質を除去し、純粋なDNAをTEバッファーまたは水で溶出します。
この方法は操作がほとんど必要なく、他の有機ベースの抽出法よりも迅速かつ簡単です。カラムベースのゲル抽出キットに比べて、反応量と溶出量を柔軟にスケールアップまたはスケールダウンできます。精製されたDNAは、制限酵素消化、クローニング、シーケンシングなどの一般的な分子生物学手順に適しています。
特長•
柔軟 — 反応量と溶出量をスケールアップまたはスケールダウンしやすい
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効率的 — 80%を超えるDNA回収率
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迅速 — 精製時間はわずか15~20分
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効果的 — 100 bpの短いDNAフラグメントに適している
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安全 — フェノール抽出を伴わない
アプリケーション•
TAEまたは
TBEバッファーで調整したアガロースゲルからのDNAフラグメントの精製
• 脱塩またはバッファー交換のためのDNAサンプルの濃縮
• PCR、制限酵素消化、脱リン酸化、標識反応の後の酵素の除去
• 取り込まれなかったヌクレオチド、プライマー、プライマーダイマーの除去
• ライゲーション後のリンカーの除去
• 残留塩、フェノール、クロロホルム、エチジウムブロマイドの除去
• RNAフリーのプラスミドDNAの精製
内容:シリカ粉末、懸濁結合バッファー、濃縮洗浄バッファー、TBEコンバージョンバッファー、詳細プロトコル
注ゲル精製DNAフラグメントを下流のクローニング反応で使用する場合は、紫外線によってDNAが損傷しないように注意してください。ゲルスライスの切除中は常に長波長紫外線(360 mm)のライトボックスを使用してください。短波長紫外線(254~312 nm)のライトボックスしか手元にない場合は、紫外線曝露を数秒程度に抑えるか、ガラス製またはプラスチック製のプレートにゲルを載せてください。代わりの方法として、目に見える色素を標準アガロースゲルに入れ、定常光でDNAバンドを可視化できます(2、3)。