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EasySelect™ Pichia Expression Kit
EasySelect™ Pichia発現キットは、酵母Pichia pastorisでのタンパク質産生に必要なすべてのコンポーネントを提供します。EasySelect™キットには、Pichia酵母株、発現ベクター、およびPichia細胞の形質転換を可能にする試薬が含まれています。Zeocin™抗生物質での選択により、コピー数の多い形質転換変異株のスクリーニングが容易になります詳細を見る
| 製品番号（カタログ番号） | 数量 |
|---|---|
| K174001 | 1キット |
製品番号（カタログ番号） K174001
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298,700
Each
数量:
1キット
EasySelect™ Pichia発現キットは、酵母Pichia pastorisでのタンパク質産生に必要なすべてのコンポーネントを提供します。EasySelect™キットには、Pichia酵母株、発現ベクター、およびPichia細胞の形質転換を可能にする試薬が含まれています。Zeocin™抗生物質での選択により、コピー数の多い形質転換変異株のスクリーニングが容易になります。
Pichia pastoris発現システムの利点：
•Pichia細胞の培養を大腸菌と同じくらい容易に行えます
• 他の微生物発現システムよりも高い細胞密度が得られます。
•他の微生物発現システムよりも細胞あたりのタンパク質を多く生成できます。
•真核生物タンパク質処理、タンパク質フォールディング、翻訳後修飾のメリットが得られます。
•振とうフラスコから産業規模の発酵まで、簡単にスケールアップできます。
実績のあるタンパク質発現システム
過去30年間にわたり、Pichia pastorisは世界中のラボや産業で使用され、ヒトを含む多くの種から数百種類もの異なるタンパク質を産生してきました（参考文献1、2、3）。Pichia pastorisは、細菌（大腸菌）や酵母（出芽酵母）と同様に簡単に増殖できますが、これらのシステムよりも多くの利点があります（参考文献4）。Pichia pastorisは、細菌や他の酵母よりもはるかに高い細胞密度まで増殖します。Pichia pastorisはメタノールを唯一の炭素源として増殖できるため、工業レベルまで比較的安価にスケールアップできます。
AOX1プロモーターの威力
EasySelect™ Pichia発現キットは、Pichiaアルコールオキシダーゼ1（AOX1）遺伝子のプロモーターを使用してタンパク質の産生を促進します。Pichia pastorisは、メタノールを唯一の炭素源として増殖できます。メタノールを唯一の炭素源として増殖した場合、AOX1 mRNAはトータルmRNAの最大5%に相当し、AOX1酵素は細胞重量の最大30%を占めます（参考文献5）。
EasySelect™ Pichia発現システムには、pPICZおよびpPICZαベクターが付属しています。pPICZおよびpPICZαベクターにはマルチクローニングサイト（MCS）が含まれており、目的の遺伝子をAOX1プロモーターの制御下で挿入できます。pPICZおよびpPICZαベクターには、検出を容易にするc-Mycタグと、タンパク質の検出と精製を容易にするポリヒスチジン（6xHis）タグも含まれています。
Pichia pastorisはタンパク質をほとんど分泌しないため、pPICZαベクターの細胞外シグナル伝達シーケンスを使用して目的のタンパク質を培養培地に分泌させることで、下流工程での精製を簡素化できます。
Zeocin™抗生物質で高コピー数の組み込みを実現
EasySelect™ Pichia発現キットは、Zeocin™抗生物質を使用して、形質転換したPichia細胞を選択します。pPICZおよびpPICZαベクターには、Streptoalloteichus hindersanus（Sh ble）由来のブレオマイシン遺伝子が含まれており、Zeocin™抗生物質に対する耐性があります。pPICZおよびpPICZαベクターは、Pichiaゲノムに安定的に組み込みできます。Zeocin™抗生物質の濃度を上げることで、最も多くの組込み体と最高のタンパク質発現レベルを持つクローンを簡単に選択できます。
EasySelect™ Pichia発現キットには、以下のコンポーネントが含まれています。
•Pichia pastorisおよび大腸菌株のStabバイアル。これで培養を開始できます。
•形質転換コンピテントPichia細胞を作製するための溶液。
• 目的遺伝子をAOX1プロモーターに融合させるためのpPICZおよびpPICZαベクター。
•pPICZベクターへの目的遺伝子の挿入を確認するためのシーケンシングプライマー。
•形質転換したPichia細胞を選択するためのZeocin™抗生物質。
研究用途専用です。診断での使用を目的としたものではありません。
関連リンク
• pPICZ A、B、Cベクターの製品インサートを見る（PDF）。
•pPICZα A、B、Cベクターの製品インサートを見る（PDF）。
•Zeocin™抗生物質の製品インサートを見る（PDF）。
•Pichia pastorisの使用に関する詳細は、InvitrogenのPichia Protocols第1版をご覧ください。
•Invitrogen製の他のPichia発現システムの詳細をご覧ください。
参考文献
1.Ceghino JL、Cregg JM.メチロ栄養酵母Pichia pastorisにおける異種タンパク質発現。FEMS Microbiol Rev. 2000年1月；24（ 1）： 45～66 。[PubMed]
2。Cereghino GP、Cereghino JL、Ilgen C、Cregg JM。酵母Pichia pastorisの発酵培養における組み換えタンパク質の産生。Curr Opin Biotechno。2002 Aug;13(4):329-32.[PubMed]
3.Cregg JM.Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems.Methods Mol Biol.2007;389:1-10.[PubMed]
4.Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris.Methods Enzymol.2009;463:169-89.[PubMed]
5.Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA.Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris.Mol Cell Biol.1989 Mar;9(3):1316-23.[PubMed]
Pichia pastoris発現システムの利点：
•Pichia細胞の培養を大腸菌と同じくらい容易に行えます
• 他の微生物発現システムよりも高い細胞密度が得られます。
•他の微生物発現システムよりも細胞あたりのタンパク質を多く生成できます。
•真核生物タンパク質処理、タンパク質フォールディング、翻訳後修飾のメリットが得られます。
•振とうフラスコから産業規模の発酵まで、簡単にスケールアップできます。
実績のあるタンパク質発現システム
過去30年間にわたり、Pichia pastorisは世界中のラボや産業で使用され、ヒトを含む多くの種から数百種類もの異なるタンパク質を産生してきました（参考文献1、2、3）。Pichia pastorisは、細菌（大腸菌）や酵母（出芽酵母）と同様に簡単に増殖できますが、これらのシステムよりも多くの利点があります（参考文献4）。Pichia pastorisは、細菌や他の酵母よりもはるかに高い細胞密度まで増殖します。Pichia pastorisはメタノールを唯一の炭素源として増殖できるため、工業レベルまで比較的安価にスケールアップできます。
AOX1プロモーターの威力
EasySelect™ Pichia発現キットは、Pichiaアルコールオキシダーゼ1（AOX1）遺伝子のプロモーターを使用してタンパク質の産生を促進します。Pichia pastorisは、メタノールを唯一の炭素源として増殖できます。メタノールを唯一の炭素源として増殖した場合、AOX1 mRNAはトータルmRNAの最大5%に相当し、AOX1酵素は細胞重量の最大30%を占めます（参考文献5）。
EasySelect™ Pichia発現システムには、pPICZおよびpPICZαベクターが付属しています。pPICZおよびpPICZαベクターにはマルチクローニングサイト（MCS）が含まれており、目的の遺伝子をAOX1プロモーターの制御下で挿入できます。pPICZおよびpPICZαベクターには、検出を容易にするc-Mycタグと、タンパク質の検出と精製を容易にするポリヒスチジン（6xHis）タグも含まれています。
Pichia pastorisはタンパク質をほとんど分泌しないため、pPICZαベクターの細胞外シグナル伝達シーケンスを使用して目的のタンパク質を培養培地に分泌させることで、下流工程での精製を簡素化できます。
Zeocin™抗生物質で高コピー数の組み込みを実現
EasySelect™ Pichia発現キットは、Zeocin™抗生物質を使用して、形質転換したPichia細胞を選択します。pPICZおよびpPICZαベクターには、Streptoalloteichus hindersanus（Sh ble）由来のブレオマイシン遺伝子が含まれており、Zeocin™抗生物質に対する耐性があります。pPICZおよびpPICZαベクターは、Pichiaゲノムに安定的に組み込みできます。Zeocin™抗生物質の濃度を上げることで、最も多くの組込み体と最高のタンパク質発現レベルを持つクローンを簡単に選択できます。
EasySelect™ Pichia発現キットには、以下のコンポーネントが含まれています。
•Pichia pastorisおよび大腸菌株のStabバイアル。これで培養を開始できます。
•形質転換コンピテントPichia細胞を作製するための溶液。
• 目的遺伝子をAOX1プロモーターに融合させるためのpPICZおよびpPICZαベクター。
•pPICZベクターへの目的遺伝子の挿入を確認するためのシーケンシングプライマー。
•形質転換したPichia細胞を選択するためのZeocin™抗生物質。
研究用途専用です。診断での使用を目的としたものではありません。
関連リンク
• pPICZ A、B、Cベクターの製品インサートを見る（PDF）。
•pPICZα A、B、Cベクターの製品インサートを見る（PDF）。
•Zeocin™抗生物質の製品インサートを見る（PDF）。
•Pichia pastorisの使用に関する詳細は、InvitrogenのPichia Protocols第1版をご覧ください。
•Invitrogen製の他のPichia発現システムの詳細をご覧ください。
参考文献
1.Ceghino JL、Cregg JM.メチロ栄養酵母Pichia pastorisにおける異種タンパク質発現。FEMS Microbiol Rev. 2000年1月；24（ 1）： 45～66 。[PubMed]
2。Cereghino GP、Cereghino JL、Ilgen C、Cregg JM。酵母Pichia pastorisの発酵培養における組み換えタンパク質の産生。Curr Opin Biotechno。2002 Aug;13(4):329-32.[PubMed]
3.Cregg JM.Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems.Methods Mol Biol.2007;389:1-10.[PubMed]
4.Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris.Methods Enzymol.2009;463:169-89.[PubMed]
5.Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA.Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris.Mol Cell Biol.1989 Mar;9(3):1316-23.[PubMed]
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
抗生物質耐性菌ゼオシン™（ZeoR）
菌株または酵母株GS115, KM71H, X-33
クローニング法制限酵素／MCS
発現メカニズム細胞ベースの発現
発現システム酵母
使用対象（アプリケーション）タンパク質発現
製品ラインEasySelect
製品タイプExpression Kit
タンパク質タグHisタグ（6x）、c-Mycエピトープタグ
数量1キット
選択剤（真核生物）Zeocin
細胞タイプ酵母細胞
フォーマットキット
プロモーターAOX1
種P. pastoris
VectorpPIC
Unit SizeEach
組成および保存条件
EasySelect Pichia Expression Kitには、プラスミドpPICZ A、B、C、およびpPICZα A、B、Cそれぞれ20 μg、Pichia pastoris株X-33（野生型）、GS115（his4）、KM71H（arg4 aox1:: ARG4）、細胞内発現と分泌発現用のコントロール株、Zeocin™抗生物質250 mg、培地（YPおよびYNB）、EasyComp™ Pichia Transformation Kit、および、5´ AOX1、3´ AOX1、αファクターシーケンシングプライマーそれぞれ2 μgが含まれています。pPICZおよびpPICZαベクターは別売りでもご用意しています。pPICZ にはlacZポジティブ発現コントロールが付属しています。
菌株は+4℃で保存してください。ベクターとプライマーを-20℃で保管してください。すべてのコンポーネントは、適切に保存した場合、6カ月間安定しています。
菌株は+4℃で保存してください。ベクターとプライマーを-20℃で保管してください。すべてのコンポーネントは、適切に保存した場合、6カ月間安定しています。
よくあるご質問（FAQ）
Pichia用のエレクトロポレーションプロトコールはありますか（開始培養液量が500 mL未満のもの）？
酵母を用いた発酵で抗生物質は使用できますか？
発酵用培地のpH調整にはどのような酸を使用すればいいでしょうか？また、pH調整は必要でしょうか？
発酵の際の窒素源は何ですか？
1X YNB（Yeast nitrogen base）の組成は？
引用および参考文献 (10)
引用および参考文献
Abstract
Fas ligand deficiency in HIV disease.
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:9159165
'Apoptosis is postulated to be involved as an anti-viral immune mechanism by killing infected cells before viral replication has occurred. The Fas-Fas ligand interaction is a powerful regulator of T cell apoptosis and could potentially act as a potent anti-viral immune mechanism against T cell tropic virus such as human
A composite Ets/Pit-1 binding site in the prolactin gene can mediate transcriptional responses to multiple signal transduction pathways.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:7673116
'Binding sites for the tissue-specific transcription factor, Pit-1, are required for basal and hormonally induced prolactin gene transcription. Although Pit-1 is phosphorylated in response to several signaling pathways, the mechanism by which Pit-1 contributes to hormonal induction of gene transcription has not been defined. Recent reports suggest that phosphorylation of
Expression and secretion of a biologically active glycoprotein hormone, ovine follicle stimulating hormone, by Pichia pastoris.
Journal:J Mol Endocrinol
PubMed ID:9845673
'The methylotrophic yeast, Pichia pastoris, has been used to co-express recombinant genes formed by fusion of the mating factor-alpha (MFalpha) leader and ovine follicle stimulating hormone (oFSH) alpha and beta subunit coding sequences. Pichia strains carrying single copies of the two fusion genes secreted recombinant oFSH (roFSH) to concentrations of
Improved tumour targeting by disulphide stabilized diabodies expressed in Pichia pastoris.
Journal:Protein Eng
PubMed ID:9488147
'Diabodies are dimeric antibody fragments held together by associated heavy and light chain variable domains present on different polypeptide chains. To improve their stability we have introduced cysteine residues into the V-domains to promote the disulphide crosslinking of the dimer. A crosslinked bivalent diabody against carcinoembryonic antigen (CEA) and a
High-level expression of recombinant Aplysia ADP-ribosyl cyclase in offhia pastoris by fermentation.
Journal:Protein Expr Purif
PubMed ID:9325145
'Cyclic ADP-ribose (cADPR), a Ca2+ mobilizing cyclic nucleotide derived from NAD+, is rapidly emerging as an endogenous modulator of Ca2(+)- induced Ca2+ release mechanisms in various cellular systems. ADP ribosyl cyclase, first isolated from the marine invertebrate Aplysia californica, cyclizes NAD+ to cADPR. In this study we have utilized the