pENTR™/D-TOPO™ Cloning Kit

pENTR™/D-TOPO™クローニングキットは、高効率の5分間のクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を利用して、平滑末端PCR産物のベクターへの方向性クローニングを行い、Gateway™システムまたはMultiSite Gateway™システムにエントリーできるようにしします。平滑末端PCR産物は、リガーゼ、PCR後の手順、制限酵素を必要とせず、90 %を超える効率で一方向にクローニングします。

このキットには、目的のPCR増幅遺伝子をクローニングおよび選択するために必要なすべてのものが付属しています。

•Gateway™ System Ready—クローニングされた遺伝子を複数のベクターシステム間で迅速に移動できます
• 迅速で使いやすい—PCRからGateway™ Entryクローンへ、わずか3ステップ、約5分のハンズオンタイムで移行します
• 効率的—正しい方向への正しい挿入で、90%を超えるクローンを実現します
• 実証済み—10年以上にわたる信頼性の高いパフォーマンス

Gateway™システムへの簡単なアクセス
Gateway™システムへのアクセスは、目的の遺伝子をPCR増幅し、その産物をキットのトポイソメラーゼ荷電pENTR™/D-TOPO™ベクターに直接添加し、5分間インキュベートして、キットのコンピテント大腸菌細胞を形質転換するだけです。Gateway™ Entryクローンを含むattLは、お客様が選択したGateway™デスティネーションベクターと効率的に組換えを行える状態になっています。

最適化されたpENTR™/D-TOPO™ベクター
pENTR™/D-TOPO™ベクター（図1）には、M13およびT7プライマーシーケンシング部位と、PCR産物の挿入部位に隣接するattL組換え部位が含まれています。これにより、クローンを簡単に配列検証し、Gateway™デスティネーションベクターを含む選択したattRへの組換えを行えます。カナマイシン耐性遺伝子とpUC起源は、大腸菌の選択および高コピー増殖に使用されます。

簡素化された特定部位クローニングベクター
Directional TOPO™クローニングテクノロジーでは、PCRクリーンアップ、ベクター調製、その他の時間のかかるDNA操作ステップが不要です。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を追加し5分間インキュベートして形質転換すると、最大90 %ので一方向に挿入されたクローンが得られます。トポイソメラーゼライゲーション反応に対する方向性をもたらすためにPCR反応で使用するフォワードプライマーに設計された4つの塩基配列を持つベクターペアの4つのベースオーバーハング（図2）。

Gateway™組換えクローニングテクノロジーの威力
Gateway™組換えクローニングテクノロジーでは、制限があるクローニングの限界を回避し、99 %効率的で可逆的なGateway™組換え反応により、ほぼすべての発現システムに1時間でアクセスできます。制限酵素、リガーゼ、サブクローニングステップ、無数のコロニーのスクリーニング、またはリシーケンシングを使用することなく、さまざまなベクター間で同じDNAの配列を移動し、時間、コスト、労力を節約します。

最先端のクローニングテクノロジー
クローニングに関しては、TOPO™クローニングテクノロジーとGateway™組換えクローニングテクノロジーが10年以上にわたり、数千人の科学者にとって信頼できるパートナーとなっています。迅速で使いやすく、効率的なTOPO™クローニングとGateway™組み換えにより、迅速なクローニングに加えて、Gateway™発現ベクターの幅広い種類間で遺伝子転写が可能になります。