Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencingは、プルーフリーディングポリメラーゼで増幅された、平滑末端PCR産物をシーケンシング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、効率の高い5分間のワンステップクローニング戦略を提供します。各キットは、各反応からより多くのインサート配列とより少ないベクター配列が返るよう特別にデザインされたシーケンシングプライマー部位があるpCR™4Blunt-TOPO™ベクター（図を参照）を使用します。これらのキットには、目的のPCRフラグメントを含む組換えベクターのクローニングおよび選択に必要なすべてのものが含まれています。

pCR™4Blunt-TOPO™ベクター—シーケンシング用に最適化
当社は、pCR™4Blunt-TOPO™ベクターから多くのクローニング部位を除去し、シーケンシングプライマー部位とインサート部位の間の距離をわずか33 bpに短縮しました。つまり、シーケンシング反応ではベクター配列が少なく、インサート配列が多くなります。pCR™4Blunt TOPO™ベクターには、一般的なシーケンシングプライマー用の部位として、M13フォワード、M13リバース、T7、T3の4つが含まれています。このキットには、それぞれのアリコートが含まれています。

pCR™4Blunt-TOPO™クローンの選択と操作
The pCR™4Blunt-TOPO™ベクターには、アンピシリンとカナマイシンの両方の耐性マーカーと、ポジティブセレクションのためのLacZα-ccdB遺伝子融合が含まれています。ベクターの最小化されたマルチクローニングサイトには、クローニングされたPCR産物の簡易的な切除のための隣接EcoRI部位と、シーケンシング前にネストされた欠失を生成するための独自のSse8387I部位がまだ含まれています。in vitro転写向けのT7およびT3プロモーターも用意されています。

簡略化されたTOPO™ベースのクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の手順、ベクターの調製、その他の時間のかかるDNA操作ステップは不要になります。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして大腸菌コンピテントセルを形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大95%まで使用することで、少ないクローンをスクリーニングし、時間とコストを節約できます。PCR™4Blunt-TOPO™ ベクターはオーバーハングを生じさせず、平滑端末 PCR 産物を残す耐熱性ポリメラーゼの校正により作成された PCR 産物を効率的にライゲーションします。


最も広く使用™ されているクローニングキットクローニングに関しては、TOPOクローニング技術が10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼できるパートナーとなっています。高速で使いやすく、効率的な TOPO™ クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

シーケンシング用Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキット—キットフォーマット
Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、お客様のニーズに応じてさまざまな利点を提供するさまざまなコンピテントセルと共にご購入いただけます。

• 一般的なクローニング：TOP10細胞（カタログ番号K2875-J10、K2875-20、K2875-40）
• 高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™ Cells（カタログ番号K2880-20、K2880-40）
• 一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号K2895-20）•迅速な増殖：Mach1™-T1^R化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号K2835-20）

関連リンク

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• プラスミド DNA 精製キット選択ガイド
• PCR 試薬、装置、および消耗品