Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencing, with One Shot™ MAX Efficiency™ DH5α-T1R E. coli
Zero Blunt&trade; TOPO&trade; PCR Cloning Kit for Sequencing, with One Shot&trade; MAX Efficiency&trade; DH5&alpha;-T1<sup>R</sup> <i>E. coli</i>
Invitrogen™

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencing, with One Shot™ MAX Efficiency™ DH5α-T1R E. coli

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencingは、プルーフリーディングポリメラーゼで増幅された、平滑末端PCR産物をシーケンシング用のプラスミドベクターに直接挿入するための詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）数量
K289520
または、製品番号K2895-20
25反応
製品番号（カタログ番号） K289520
または、製品番号K2895-20
価格（JPY）
78,800
온라인 행사
Ends: 26-Dec-2025
131,400
割引額 52,600 (40%)
Each
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数量:
25反応
Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencingは、プルーフリーディングポリメラーゼで増幅された、平滑末端PCR産物をシーケンシング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、効率の高い5分間のワンステップクローニング戦略（TOPO™クローニング）を提供します。各キットは、特別にデザインされたシーケンシングプライマー部位を持つpCR™4Blunt-TOPO™ベクターを使用しており、各反応からより多くのインサート配列とより少ないベクター配列を戻すことができます。これらのキットには、目的のPCRフラグメントを含む組み換えベクターのクローニングおよび選択に必要なすべてのものが含まれています。

より多くの配列を取得—標準的なシーケンシングプライマーを使用する場合、より多くのインサート配列とより少ないベクター配列が可能

• 迅速かつ簡単—PCRからクローンへの移行はわずか3ステップで完了し、ハンズオン時間はわずか5分
• 効率的—正確なインサートを使用して最大95%のクローンを実現
• 実証済み—10年以上にわたる4,000を超える引用による信頼性の高い性能

シーケンス用Zero Blunt™ TOPO™クローニングキットの概要
• ベクター：pCR™4Blunt-TOPO™ベクター—シーケンシングの結果を改善するために最適化
• クローニング法：TOPO™クローニング—Topoisomerase Iに基づく、平滑末端のあるプルーフリーディングポリメラーゼ増幅PCR産物のベクターへの5分間のライゲーション
• コンピテントセルさまざまなオプション—一般用、高効率、バクテリオファージT1耐性、急速に増殖するなどのそれぞれの特徴を持つコンピテントセルのいずれかを含むキットを選ぶことができます

pCR™4Blunt-TOPO™ ベクター—シーケンシング用に最適化
pCR™4Blunt-TOPO™ ベクターからマルチクローニングサイトを除去し、シーケンシングプライマー部位とインサート部位との距離をわずか33 bpに短縮しました。つまり、シーケンシング反応ではベクター配列が少なく、インサート配列が多くなります。pCR™4Blunt TOPO™ベクターには、一般的なシーケンシングプライマー用の部位として、M13フォワード、M13リバース、T7、T3の4つが含まれています。このキットにはそれぞれのアリコートが含まれています。

pCR™4Blunt-TOPO™クローンの選択と操作
pCR™4Blunt-TOPO™ベクターには、アンピシリンとカナマイシンの両方の耐性マーカーと、ポジティブセレクションのためのLacZα-ccdB遺伝子融合が含まれています。ベクターの最小化されたマルチクローニングサイトには、クローニングされたPCR産物の簡易的な切除のための隣接EcoRI部位と、シーケンシング前にネストされた欠失を生成するための独自のSse8387I部位がまだ含まれています。in vitro転写向けのT7およびT3プロモーターも用意されています。

簡略化されたTOPO™ベースのクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の手順、ベクターの調製、その他の時間のかかるDNA操作ステップは不要になります。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして、提供された大腸菌コンピテントセルを形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大95%まで使用できるため、スクリーニングするクローンの数を減らし、時間とコストを節約できます。PCR™4Blunt-TOPO™ベクターはオーバーハングを生じさせず、平滑端末PCR産物を残す耐熱性ポリメラーゼの校正により作成されたPCR産物を効率的にライゲーションします。


最も広く使用™ されているクローニングキットクローニングに関しては、TOPOクローニング技術が10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼できるパートナーとなっています。高速で使いやすく、効率的な TOPO™ クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

シーケンシング用Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットオプション
シーケンシング用Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、お客様のニーズに応じてさまざまな利点を提供するさまざまなコンピテントセルと共にご購入いただけます。

• 一般的なクローニング：TOP10（カタログ番号K2875-J10、K2875-20、K2875-40）
• 高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™ Cells（カタログ番号K2880-20、K2880-40）
• 一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号K2895-20）•迅速な増殖：Mach1™-T1Rの化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号K2835-20）

TOPO™製品は研究用途専用です。ヒトまたは動物の治療または診断用には使用できません。

関連リンク
• カスタムベクター構築およびクローニングサービス
• プラスミドDNA精製キット選択ガイド
• PCR試薬、装置、および消耗品
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
菌株または酵母株DH5α
クローニング法Blunt TOPO™
使用対象（アプリケーション）クロマチンバイオロジー
反応数25 reactions
製品ラインOne Shot
製品タイプPCRクローニングキット
プロモーターT7、T3
数量25反応
ベクターBlunt DNA クローニングベクター
フォーマットキット
Unit SizeEach
組成および保存条件
ボックス1：
• Topoisomerase i-activated PCR™4 Blun-TOPO™ ベクター
• 塩溶液
• dNTPs
• コントロールテンプレート
• T3、T7、M13 フォワード、および M13 リバースプライマー
•コント ル PCR プライマー
• 滅菌水

-5～-30℃で保存します。
すべての試薬は、適切に保存すると6ヶ月間安定しています。

ボックス 2 ：
•One Shot™ケミカルコンピテントまたはElectrocomp™大腸菌
•S.O.C.培地
•、スーパーコイルpUC19コントロールプラスミド

は、-68～-85℃で保存します。

よくあるご質問（FAQ）

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

I'm seeing a lot of vector-only colonies when I try to perform a negative control reaction using vector only (no insert) for a TOPO reaction. Is my TOPO vector re-ligating?

Using the vector only for transformation is not a recommended negative control. The process of TOPO-adaptation is not a 100% process, therefore, there will be “vector only” present in your mix, and colonies will be obtained.

I'm trying to clone in my phosphorylated PCR product into a TOPO vector, and I'm getting no colonies. However, when I clone the same product into a TA vector, everything works perfectly. Why is this?

Phosphorylated products can be TA cloned but not TOPO cloned. This is because the necessary phosphate group is contained within the topoisomerase-DNA intermediate complex of the vector. TOPO vectors have a 3' phosphate to which topoisomerase is covalently bound and a 5' phosphate. Non-TOPO linear vectors (TA and Blunt) have a 3' OH and a 5' phosphate. Phosphorylated products should be phosphatased (CIP) before TOPO cloning.

I'm able to get a lot of colonies, however, none contain my insert of interest. What should I do?

You may be cloning in an artifact. TA and TOPO Cloning are very efficient for small fragments (< 100 bp) present in certain PCR reactions. Gel-purify your PCR product using either a silica-based DNA purification system or electroelution. Be sure that all solutions are free of nucleases (avoid communal ethidium bromide baths, for example.)

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