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Citations & References (5)
Invitrogen™

pTrcHis2 TOPO™ TA Expression Kit

pTrcHis-TOPO™ TA発現キットおよびpTrcHis2-TOPO TA 発現キットを使用すると、trcプロモーターからの高レベルの調節された発現のために、PCR産物を原核生物発現ベクターに迅速かつ効率的にクローニングできます。pTrcHis-TOPO™またはpTrcHis2-TOPO™の各キットのベクターには、大腸菌の真核生物タンパク質のトランスレーション効率を向上させるためのminicistron元素トが含まれています。>85 %のクローニング効率での5分間TOPOクローニングのために詳細を見る
テクニカルサポートオーダーサポート
製品番号（カタログ番号）数量
K44000120 reactions
製品番号（カタログ番号） K440001
価格（JPY）
111,700
Online offer
Ends: 27-Mar-2026
159,600
割引額 47,900 (30%)
Each
数量:
20 reactions
pTrcHis-TOPO™ TA発現キットおよびpTrcHis2-TOPO TA 発現キットを使用すると、trcプロモーターからの高レベルの調節された発現のために、PCR産物を原核生物発現ベクターに迅速かつ効率的にクローニングできます。pTrcHis-TOPO™またはpTrcHis2-TOPO™の各キットのベクターには、大腸菌の真核生物タンパク質のトランスレーション効率を向上させるためのminicistron元素トが含まれています。>85 %のクローニング効率での5分間TOPOクローニングのために、どちらのベクターも直線化され、トポイソメラーゼIで活性化されています。タンパク質の浄化と検出を簡素化するために、pTrcHis-TOPO™ベクターとpTrcHis2-TOPO™ベクターには次の機能が含まれています

pTrcHis-TOPO™

• 抗Xpress™抗体による検出用のN末端Xpress™エピトープ ニッケルキレート樹脂を使用した浄化と抗HisG抗体による検出のためのN末端ポリヒスチジン（6xHis）タグ
•N- N末端融合タグを効率的に除去するためのエンテロキナーゼ切断部位

pTrcHis2-TOPO™
• 抗myc抗体による検出用のC末端c-mycエピトープ
•ニッケルキレート樹脂を使用した浄化と抗His（C-term）抗体による検出のためのC末端ポリヒスチジン（6xHis）タグ
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
抗生物質耐性菌アンピシリン（AmpR）
菌株または酵母株TOP10
切断EK（エンテロキナーゼ）認識部位
構成または誘導システム誘導型
発現メカニズム細胞ベースの発現
発現システムE. coli
誘導試薬IPTG
製品タイプTA Expression Kit
数量20 reactions
選択剤（真核生物）なし
ベクターpTrc
クローニング法TOPO™-TA
製品ラインTOPO
プロモーターTrc, lacO
タンパク質タグHisタグ（6x）、c-Mycエピトープタグ, c-Myc Epitope Tag
Unit SizeEach
組成および保存条件
pTrcHis-TOPO TA Expression Kitおよび pTrcHis2-TOPO™ TA Expression Kitにはそれぞれ2つのボックスが含まれています。TOPO™ TAボックスには、200 ngの線形化されたトポイソメラーゼI活性化-pTrcHis-TOPO™ベクターまたはpTrcHis2-TOPO™ベクター、滅菌水、dNTP、10X PCRバッファー、コントロールテンプレートおよびプライマー、シーケンシングまたはPCRスクリーニング用プライマー、および発現コントロールプラスミドが含まれています。One Shot™ TOP10ボックスには、ケミカルコンピテンTOP10大腸菌の50-µlのアリコートが21個、S.O.C.培地、および超らせん型コントロールプラスミドが含まれています。TOPO TA クローニング™ボックスは-20℃で保管してください。One Shot™ボックスは-80℃で保管してくださいすべての試薬は、適切な保管条件であれば、6カ月間安定していることが保証されています。

よくあるご質問（FAQ）

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What are the advantages and/or disadvantages of using TOP10, DH5α, or other cloning strains versus BL21 Star (DE3) or BL21 (DE3) cells for expression with the pTrc system?

Top10, DH5α, other cloning strains

Advantages:
- Saves time, can go directly from cloning to expression.
- The glycerol stock is more stable because these strains are endA- and recA-.

Disdvantages:
- If GOI is toxic, the cloning step can be difficult.
- These cloning strains are not protease-deficient; therefore, the protein may be degraded.

BL21 Star(DE3) or BL21 (DE3)

Advantages:
- These expression strains are protease-deficient.
- You have to transform the plasmid into an expression strain.
- The glycerol stock may be unstable because these expression strains are not endA- and recA-.
- The (DE3) part is wasted because the promoter does not need T7 RNA polymerase.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

What competent cell strain can I use for expression with my pTrc Expression System?

The pTrc promoter is recognized by E. coli RNA polymerase, not T7 polymerase, and therefore can be expressed in any E. coli strain, not just BL21 strains. Therefore, you can use Top10, DH5α, etc. for expression. However, if your gene is toxic, the cloning step can be difficult as there is leakiness in expression.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

How does glucose repress the pTrc promoter?

A transcriptional activator protein called CAP (catabolite activator protein) normally binds upstream of the trc promoter and activates transcription. This protein requires cAMP to bind the DNA. Adding glucose to the medium can reduce intracellular cAMP levels. Supplementing LB medium and agar plates with glucose will repress basal level transcription from the trc promoter. We recommend that you include 25 mM, 0.5% glucose in the selection medium to ensure stability of your insert.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

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引用および参考文献 (5)

引用および参考文献
Abstract
Characterization of a Novel Drosophila melanogaster Galectin. EXPRESSION IN DEVELOPING IMMUNE, NEURAL, AND MUSCLE TISSUES.
Authors: Pace Karen E; Lebestky Tim; Hummel Thomas; Arnoux Pascal; Kwan Kent; Baum Linda G;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:11809773
'We have cloned and characterized the first galectin to be identified in Drosophila melanogaster. The amino acid sequence of Drosophila galectin showed striking sequence similarity to invertebrate and vertebrate galectins and contained amino acids that are crucial for binding beta-galactoside sugars. Confirming its identity as a galectin family member, the ... More
Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus/Human Herpesvirus 8 Transcriptional Activator Rta Is an Oligomeric DNA-Binding Protein That Interacts with Tandem Arrays of Phased A/T-Trinucleotide Motifs.
Authors:Liao W, Tang Y, Kuo YL, Liu BY, Xu CJ, Giam CZ,
Journal:J Virol
PubMed ID:12915555
'Kaposi''s sarcoma associated herpesvirus (KSHV)/human herpesvirus 8 (HHV-8) encodes an immediate early transcriptional activator, Rta, which mediates viral reactivation from latency and lytic viral replication. Here we report the purification and characterizations of HHV-8 Rta and its interaction with Rta-responsive DNA elements. The Rta response element (RtaRE) in the promoter ... More
Assimilation of nicotinamide mononucleotide requires periplasmic AphA phosphatase in Salmonella enterica.
Authors:Grose JH, Bergthorsson U, Xu Y, Sterneckert J, Khodaverdian B, Roth JR,
Journal:J Bacteriol
PubMed ID:15968063
'Salmonella enterica can obtain pyridine from exogenous nicotinamide mononucleotide (NMN) by three routes. In route 1, nicotinamide is removed from NMN in the periplasm and enters the cell as the free base. In route 2, described here, phosphate is removed from NMN in the periplasm by acid phosphatase (AphA), and ... More
Transition state analogue inhibitors of purine nucleoside phosphorylase from Plasmodium falciparum.
Authors: Kicska Gregory A; Tyler Peter C; Evans Gary B; Furneaux Richard H; Kim Kami; Schramm Vern L;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:11707439
'Immucillins are logically designed transition-state analogue inhibitors of mammalian purine nucleoside phosphorylase (PNP) that induce purine-less death of Plasmodium falciparum in cultured erythrocytes (Kicska, G. A., Tyler, P. C., Evans, G. B., Furneaux, R. H., Schramm, V. L., and Kim, K. (2002) J. Biol. Chem. 277, 3226-3231). PNP is present ... More
Characterization of monomeric L1 metallo-beta -lactamase and the role of the N-terminal extension in negative cooperativity and antibiotic hydrolysis.
Authors: Simm Alan M; Higgins Catherine S; Carenbauer Anne L; Crowder Michael W; Bateson John H; Bennett Peter M; Clarke Anthony R; Halford Stephen E; Walsh Timothy R;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:11940588
The L1 metallo-beta-lactamase from Stenotrophomonas maltophilia is unique among this class of enzymes because it is tetrameric. Previous work predicted that the two regions of important intersubunit interaction were the residue Met-140 and the N-terminal extensions of each subunit. The N-terminal extension was also implicated in beta-lactam binding. Mutation of ... More