TOPO™ TA Cloning™ Kit for Subcloning, with One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli
TOPO&trade; TA Cloning&trade; Kit for Subcloning, with One Shot&trade; Mach1&trade; T1 Phage-Resistant Chemically Competent <i>E. coli</i>
Citations & References (9)
Invitrogen™

TOPO™ TA Cloning™ Kit for Subcloning, with One Shot™ Mach1™ T1 Phage-Resistant Chemically Competent E. coli

TOPO™ TA Cloning™ Kits for Subcloningは、Taqポリメラーゼ増幅PCR産物をサブクローニング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、5分間の高効率ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）数量
K45102025反応
製品番号（カタログ番号） K451020
価格（JPY）
115,400
Each
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数量:
25反応
TOPO™ TA Cloning™ Kits for Subcloningは、Taqポリメラーゼ増幅PCR産物をサブクローニング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、5分間の高効率ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します。各キットは、サブクローニングに便利な制限部位を含むpCR™ 2.1-TOPO™ TAベクターを使用します。クローニングキットは、お客様のニーズや予算に応じて、さまざまなコンピテントセル付きまたはコンピテントセルなしでご利用になれます。TOPO™ TA Cloning™ Kits for Subcloningの特長：

•迅速かつ簡単—PCRからクローンへの移行はわずか3ステップで完了し、ハンズオン時間はわずか5分
• 効率的—正確なインサートを使用して最大95%のクローンを取得
• 実証済み—10年以上にわたる4,000を超える引用による信頼性の高い性能
• シンプル—リガーゼ、PCR後の処理、特定の配列を含むPCRプライマーは不要

TOPO™ TA Cloning™ Kits for Subcloning—概要

• ベクター：pCR™ 2.1-TOPO™ TAベクター—インサートに隣接する15の便利な制限部位を含むサブクローニングベクターで、簡単で方向性の高いサブクローニングを実現

• クローニング法：TOPO™ TA Cloning™—3′Aオーバーハング（Taqポリメラーゼ増幅）を含むPCR産物のTオーバーハングを含むTOPO™ベクターへのトポイソメラーゼIベース5分間ライゲーション

• コンピテントセル：さまざまなオプション—一般用、高効率、バクテリオファージT1耐性、急速に増殖するなどのそれぞれの特徴を持つコンピテントセルのいずれかを含むキットから選択するか、または独自のものを使用

pCR™ 2.1-TOPO™ TAベクター—クローニングおよびサブクローニングの簡易性
pCR™ 2.1-TOPO™ TAベクターは、Taqポリメラーゼ増幅PCR産物（TA Cloning™）の直接ライゲーションのために3'-チミジン（T）オーバーハングで線形化され、共有結合したトポイソメラーゼIで「活性化」されます。ライガーゼを追加する必要はなく、クローニングは5分で完了します。PCR産物インサート部位に隣接するEcoRI部位によりインサートの切除が容易になり、PCRインサートに隣接する15の便利な制限部位の任意の組み合わせを使用して簡単で方向性の高いサブクローニングを実現できます。

pCR™ 2.1-TOPO™ TAクローンの選択および操作
pCR™ 2.1-TOPO™ TAベクターには、アンピシリンとカナマイシンの両方の耐性マーカーと、青白スクリーニング用のLacZα遺伝子が含まれています。

簡略化されたTOPO™ベースクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の処理、ベクター調製、またはその他の時間のかかるDNA操作ステップは不要になります。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして、大腸菌コンピテントセルを形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを含むクローンを最大95%まで使用できるため、スクリーニングするクローンの数を減らし、時間とコストを節約できます。このキットで使用されるpCR™ 2.1-TOPO™ TAベクターには3'-Tオーバーハングが付属しており、3'-Aオーバーハングを含むTaqポリメラーゼ増幅PCR産物を効率的にライゲーションできます。

クローニングの標準
クローニングの分野でTOPO™クローニング技術は10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼性の高いパートナーとなっています。高速で使いやすく効率的なTOPO™クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

TOPO™ TA Cloning™ Kit for Subcloning—キットオプション
TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencingは、お客様のニーズに応じて異なる利点をもたらすさまざまなコンピテントセルとともに購入できます。

• 一般的なクローニング：TOP10細胞（カタログ番号K4500-01、K4500-40）
• 高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™細胞（カタログ番号K4560-01、K4560-40）
• 一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R細胞（カタログ番号K4520-01、K4520-40）
• 迅速な増殖：Mach1™ -T1R化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号K4510-20）
•自作のコンピテントセルを使用：柔軟性を高めながらコスト削減が可能（カタログ番号450641）

また、クリーンでシーケンス対応の組み換えプラスミドの分離に使用するためのPureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit（カタログ番号K4500-02およびK4510-02）を含むキットの2バージョンを提供しています。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
菌株または酵母株Mach1™
細胞タイプケミカルコンピテント
クローニング法TOPO™-TA
使用対象（アプリケーション）クロマチンバイオロジー
製品ラインOne Shot
製品タイプCloning Kit
数量25反応
ベクターTOPO TA クローニングベクター
フォーマットキット
Unit SizeEach
組成および保存条件
ボックス1：
• Topoisomerase I-activated PCR™2.1 TOPO™ ベクター
• PCR バッファー
• Salt 溶液
• dNTPs
• コントロールテンプレート
• M13 フォワードおよびリバースプライマー
• コントロール PCR プライマー
• Sterile Water

-5～-30℃で保存します。
すべての試薬は、適切に保存すると6ヶ月間安定しています。

ボックス 2 ：
•One Shot™ケミカルコンピテントまたはElectrocomp™大腸菌
•S.O.C.培地
•、スーパーコイルpUC19コントロールプラスミド

は、-68～-85℃で保存します。

よくあるご質問（FAQ）

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.

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引用および参考文献 (9)

引用および参考文献
Abstract
Simian-human immunodeficiency virus containing a human immunodeficiency virus type 1 subtype-E envelope gene: persistent infection, CD4(+) T-cell depletion, and mucosal membrane transmission in macaques.
Authors:Himathongkham S, Halpin NS, Li J, Stout MW, Miller CJ, Luciw PA
Journal:J Virol
PubMed ID:10933692
'The envelope (env) glycoprotein of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) determines several viral properties (e.g., coreceptor usage, cell tropism, and cytopathicity) and is a major target of antiviral immune responses. Most investigations on env have been conducted on subtype-B viral strains, prevalent in North America and Europe. Our study ... More
Overexpression of Xenopus laevis growth hormone stimulates growth of tadpoles and frogs.
Authors:Huang H, Brown DD
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:10618393
'The role of growth hormone (GH) in amphibian metamorphosis is ambiguous based on experiments in which mammalian GH was administered to tadpoles and frogs. We have reexamined the effects of GH by producing transgenic Xenopus laevis that overexpress the cDNA encoding X. laevis GH. These transgenic tadpoles take the same ... More
Identification of cardiac glycoside molecules as inhibitors of c-Myc IRES-mediated translation.
Authors:Didiot MC, Hewett J, Varin T, Freuler F, Selinger D, Nick H, Reinhardt J, Buckler A, Myer V, Schuffenhauer A, Guy CT, Parker CN
Journal:J Biomol Screen
PubMed ID:23150017
'Translation initiation is a fine-tuned process that plays a critical role in tumorigenesis. The use of small molecules that modulate mRNA translation provides tool compounds to explore the mechanism of translational initiation and to further validate protein synthesis as a potential pharmaceutical target for cancer therapeutics. This report describes the ... More
A dual-specificity aminoacyl-tRNA synthetase in the deep-rooted eukaryote giardia lamblia.
Authors:Bunjun S, Stathopoulos C, Graham D, Min B, Kitabatake M, Wang AL, Wang CC, Vivares CP, Weiss LM, Soll D
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:11078517
'Cysteinyl-tRNA (Cys-tRNA) is essential for protein synthesis. In most organisms the enzyme responsible for the formation of Cys-tRNA is cysteinyl-tRNA synthetase (CysRS). The only known exceptions are the euryarchaea Methanococcus jannaschii and Methanobacterium thermoautotrophicum, which do not encode a CysRS. Deviating from the accepted concept of one aminoacyl-tRNA synthetase per ... More
Cost-effective method to synthesize fluorescently labeled DNA size standards using cloned AFLP fragments.
Authors:Ueno S, Tsumura Y, Washitani I,
Journal:Biotechniques
PubMed ID:12813879
n/a
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