TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with pCR™4-TOPO™ Vector, One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli, and PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with pCR™4-TOPO™ Vector, One Shot™ TOP10 Chemically Competent <i>E. coli</i>, and PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

Invitrogen™

TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with pCR™4-TOPO™ Vector, One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli, and PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencingは、Taqポリメラーゼ増幅PCR産物をシーケンシング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、5分間の高効率ワンステップクローニング戦略（「TOPO™ クローニング」詳細を見る

製品番号（カタログ番号）	数量
K457502	25反応

製品番号（カタログ番号） K457502

価格（JPY）

85,900

온라인 행사

Ends: 26-Dec-2025

143,300

割引額 57,400 (40%)

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TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencingは、Taqポリメラーゼ増幅PCR産物をシーケンシング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、5分間の高効率ワンステップクローニング戦略（「TOPO™ クローニング」）を提供します。各キットは、特別にデザインされたシーケンシングプライマー部位を含むpCR™4-TOPO™ TAベクターを使用しており、各反応からより多くのインサート配列とより少ないベクター配列を戻すことができます。これらのキットには、目的のPCRフラグメントを含む組み換えベクターのクローニングおよび選択に必要なすべてのものが含まれています。

• より多くの配列を取得—標準的なシーケンシングプライマーを使用する場合、より多くのインサート配列とより少ないベクター配列が可能
• 迅速かつ簡単—PCRからクローンへの移行はわずか3ステップで完了し、ハンズオン時間はわずか5分
• 効率的—正確なインサートを使用して最大95%のクローンを実現
• 実証済み—10年以上にわたる4,000を超える引用による信頼性の高い性能

TOPO™ TA Cloning™ Kits for Sequencing Kit概要
• ベクター：pCR™4-TOPO™ TAベクター—シーケンシングの結果を改善するために最適化されたクローニングベクター
• クローニング法：TOPO™ TA Cloning —3´Aオーバーハング（Taq増幅）を含むPCR産物のベクターへのトポイソメラーゼIベース5分間ライゲーション
• コンピテントセル：さまざまなオプション—一般用、高効率、バクテリオファージT1耐性、急速に増殖するなどのそれぞれの特徴を持つコンピテントセルのいずれかを含むキットを選ぶことができます

pCR™4-TOPO™ TAベクター—シーケンシング用に最適化
pCR™4-TOPO™ TAベクターからマルチクローニングサイトを除去し、シーケンシングプライマー部位とインサート部位との距離をわずか33 bpに短縮しました。つまり、シーケンシング反応ではベクター配列が少なく、インサート配列が多くなります。PCR™4-TOPO™ TA ベクターには、4 種類の一般的なシーケンシングプライマー用の部位があります。M13フォワード、M13リバース、T7、T3の4つが含まれています。このキットにはそれぞれのアリコートが含まれています。

pCR™4-TOPO™ TAクローンの選択と操作
pCR™4-TOPO™ TAベクターには、アンピシリン耐性マーカーおよびナマイシン耐性マーカー、ポジティブセレクションと青／白スクリーニングのためのLacZα-ccdB遺伝子融合が含まれています。ベクターの最小化されたマルチクローニングサイトには、クローニングされたPCR産物の簡易的な切除のための隣接EcoRI部位と、シーケンシング前にネストされた欠失を生成するための独自のSse8387I部位がまだ含まれています。in vitro転写向けのT7およびT3プロモーターも用意されています。

簡略化されたTOPO™ベースのクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の手順、ベクターの調製、その他の時間のかかるDNA操作ステップは不要になります。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして、提供された大腸菌コンピテントセルで形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大95%まで使用できるため、スクリーニングするクローンの数を減らし、時間とコストを節約できます。このキットで使用されるpCR™4-TOPO™ TAベクターには3´Tオーバーハングが付属しており、3´Aオーバーハングを含むTaq増幅PCR産物を効率的にライゲーションできます。

クローニングの標準
クローニングの分野でTOPO™クローニング技術は10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼性の高いパートナーとなっています。高速で使いやすく効率的なTOPO™クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencingのキットオプション
TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencingは、お客様のニーズに応じて異なる利点をもたらすさまざまなコンピテントセルとともに購入できます。

• 一般的なクローニング：TOP10（カタログ番号K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
• 高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™細胞（カタログ番号K4580-01、K4580-40）
• 一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号K4595-01、K4595-40）
• 迅速な増殖：Mach1™-T1Rの化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号K4530-20）

当社は、クリーンでシーケンス対応の組み換えプラスミドの分離に使用するためのPureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit（カタログ番号K4575-02）を含むキットのバージョンも提供しています。

TOPO™製品は研究用途にのみ使用できます。ヒトまたは動物の治療または診断用には使用できません。

関連リンク
• カスタムベクター構築およびクローニングサービス
• プラスミドDNA精製キット選択ガイド
• PCR試薬、装置、および消耗品

研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。

菌株または酵母株TOP10

細胞タイプケミカルコンピテント

クローニング法TOPO™-TA

反応数25 Reactions

製品ラインOne Shot

製品タイプCloning Kit

プロモーターT7、T3

数量25反応

ベクターTOPO TA クローニングベクター

フォーマットキット

Unit SizeEach

組成および保存条件

ボックス1：
• Topoisomerase I-activated pCR™4-TOPO™ベクター
• PCRバッファー
• 塩溶液
• dNTP
• 塩溶液
• T3、T7、M13フォワードおよびM13リバースプライマー
• コントロールPCRプライマー
• 滅菌水

-5～-30°℃で保管。
すべての試薬は、適切に保管されていれば6ヶ月間は安定しています。

ボックス2：
• One Shot™ Chemically コンピテントまたは Electrocomp™ 大腸菌
• S.O.C. 培地
• スーパーコイル pUC19 コントロールプラスミド。

-68～-85℃で保存します

。ボックス 3
： PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit（カタログ番号 K4575-02）。

室温で保管します。

よくあるご質問（FAQ）

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.

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