BLOCK-iT™ Inducible Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kitは、従来のRNAiベクターの利点（安定した発現とウイルス導入機能）と、組織特異的発現の機能、および同一の転写産物からの複数の標的ノックダウンの機能を兼ね備えています。BLOCK-iPol™ II miR RNAi Expression Vector KitおよびBLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression Systemsは、標的配列と100%の相同性を持つように作成され標的切断をもたらす人工miRNAを発現するように設計されています。インビトロジェンの受賞歴のあるBLOCK-iT™ RNAi Designerを使用すると、70%以上のコンストラクトが70%以上のノックダウンを生成します。Invitrogen Pol II発現ベクターファミリーには、以下のようなものがあります。

–CMV前初期プロモーターからの強力な発現、MultiSite Gateway™組換えを介して組織特異的または他の制御されたプロモーターを使用するオプションがあります。
–遺伝子発現用のInvitrogen’s Gateway™目的(DEST)ベクターの多くとの互換性があります。

–新しいBLOCK-iT™誘導型Pol II miR RNAi発現ベクターキットw/EmGFPでRNAi応答の開始を制御できます。
–BLOCK-iT™ HiPerform™レンチウイルスPolII miR RNAi発現システムとEmGFP組み合わせた新しい目的ベクター。新しいベクターには、mRNA安定化シーケンス（WPRE）と核インポートシーケンス（cPPT）が含まれており、これによりウイルスの力価とEmGFPの発現レベルを最大5倍に高めています。さらに、マウスPGK-1プロモーターからブラスティチジン耐性が発現され、複数回の継代後のシャットダウンを回避します。

–Emerald GFP（EmGFP）のコシストロニック発現により、miR RNAiによるノックダウンとEmGFP発現との相関が得られます。

–同一転写物上に複数の人工miR RNAi配列を発現させることで、複数の遺伝子を同時にノックダウンし、合成表現型を生成することができます。

新しいBLOCK-iT™ Inducible Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFPは、RNAi実験を調節する機能を提供します。このキットには、pT-REx-DEST30 Gateway™ベクターが含まれており、簡単なクローニングおよびシャットリング技術を用いて、誘導性ノックダウンに適したmiR RNAi発現ベクターを生成することができます。ｐT-Rex-DEST30 Gateway™ベクターには、CMVプロモーターが含まれており、テトラサイクリンオペレーター（tetO2）シーケンスのコピーが2つ含まれているため、高レベルで調節された発現が可能です。これにより、目的遺伝子が不可欠であっても、安定的に形質転換された細胞株の機能喪失の研究が可能になります。また、miR RNAi発現の誘導を停止して、遺伝子機能の回復中に表現型変化を測定することもできます。

さまざまな発現オプションについては、EmGFP（pcDNA™6.2-3GW/EmGFP-miRベクターのみ）、miRフラキング領域、および目的のターゲットに同相なmiRNAを含むmiR RNAiカセットをさまざまなDESTベクターに簡単に移動できます。これは、miR RNAiカセットがpDONR™ベクター（BP 反応）に転写され、その後任意のDEST ベクター（LR反応）に転写されるGateway™組み換え反応によって起こります。HiPerform™システムには、高いウイルス力価とEmGFP発現用の新しいpLenti6.4/RF R2/V5-DEST目的ベクターがあります。