BLOCK-iT™ Adenoviral RNAi Expression System
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Invitrogen™

BLOCK-iT™ Adenoviral RNAi Expression System

pAd/BLOCK-iT™-DEST RNAi Gateway™ Vector は、アデノウイルスベクターから in vivo での短いヘアピン RNA詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
K494100
または、製品番号K4941-00
20反応
製品番号(カタログ番号) K494100
または、製品番号K4941-00
価格(JPY)
285,700
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数量:
20反応
pAd/BLOCK-iT™-DEST RNAi Gateway™ Vector は、アデノウイルスベクターから in vivo での短いヘアピン RNA(shRNA)の効率的な導入と一過性発現に使用できます。新しいクローニングプロセス では、U6 pol IIIプロモーターの直後に約50 bpのDNAオリゴヌクレオチドがBLOCK-iT™ U6エントリーベクターに入ります。pad/BLOCK-iT™-DEST ベクターにエントリーベクターを効率的に再結合した後、ウイルス生産と形質導入を行うと、U6 プロモーターによって駆動される shRNA は、ほとんどの分割または非分割哺乳類細胞型で一時的に発現することができます。生成された shRNA は宿主防御メカニズムを回避し、RNAi 遺伝子ノックダウン応答の生成に効果的です。

pAd/BLOCK-iT™-DEST ベクター(図 1)は以下を提供します。

•RNAiカセットまたは任意のattL-隣接プロモーターおよび遺伝子配列を含むattL-隣接U6 Gateway™エントリーベクターとの効率的な組み換えのためのattR部位に囲まれたプロモーターのない領域
•効率的なアデノウイルスパッケージングと目的とするshRNAのデリバリーに必要なすべてのコンポーネント。このベクターを使用すると、哺乳類細胞の種類と動物モデルの分裂と非分裂の両方における遺伝子ノックダウンの一過性解析が可能になります。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
クローニング法Gateway™
構成または誘導システム構造的
供給タイプアデノウイルス
製品ラインBLOCK-iT
製品タイプRNAi Expression Vector Kit
数量20反応
RNAiタイプshRNA
ベクターpAd
プロモーターU6
Unit SizeEach
組成および保存条件
pAd/Block-iT™ RNAi Gateway™ ベクターは、150 ng/µL の濃度 でスーパーコイル状に供給され、10µg のポジティブコントロールベクターを含みます。BLOCK-iT™ RNAi Adenoviral Expression System には、BLOCK-iT™ U6 Entry Vector Kit、pAd/BLOCK-iT™- DEST ベクターおよびコントロール、293A Cell line、LR Clonase™ 酵素ミックスが含まれます。ベクターを-20℃で保存してください。細胞株を液体窒素で保存します。LR Clonase™ ミックスは-80℃で保存します。適切に保存した場合、6カ月間安定しています。

よくあるご質問(FAQ)

BLOCK-iT miR RNAi expression systemは他の同様のシステムと比べて、どのようなメリットがありますか?

BLOCK-iT miR RNAi expression systemでは、CMV、Ubc、組織特異的なPromoter、誘導型Promoter等 幅広いPolII系Promoterを使用することができます。またこのシステムを使用すれば、一つのベクターに複数の配列を導入することもできます。結果、一つのPlasmidで複数位置や遺伝子をターゲットにKnockdownすることができます。また更なるメリットとしては、GFPつきのmiRNA expression vectorを使用すれば、GFPの発現にて、Transfection効率がモニターすることができます。 下記をご参照ください。 https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/rnai/vector-based-rnai/pol-ii-mir-rnai-vectors.html

BLOCK-iT miR RNAi expression systemで複数の遺伝子や位置をターゲットにすることができますか?

はい、miRNA cloning vectorは複数のmiRNA配列をつなげることが簡単にできるようになっています。これにより、おなじmiRNA配列をつなげて、転写量を上げたり、複数のシークエンスをつなげて一緒に転写させることが可能です。

BLOCK-iT miR RNAi Expression Kitはアデノウイルスのキットを互換性ありますか?

はい、miR miRNA vectorsはGateway®のクローニングに対応しています。そのため、miR miRNA expression cassette はGateway®対応のウイルスのベクターに組換えすることができます。

BLOCK-iT miR RNAi Kitはどのような機構でKnockdownを行いますか?特定のターゲットmRNAを分解しますか?それとも抑制するだけですか? また、このシステムで内在性のmiRNAの解析もできますか?

miRNA vectorは、内在性miRNAの機構を使用して、特定のターゲット遺伝子をKnockdownします。しかしながら、内在性のmiRNAへの使用については、弊社では、検討しておりません。
内在性miRNAは、一般的にターゲットと100%のホモロジーを持っておらず、転写の抑制を誘導します。弊社の製品は、ターゲットと100%一致する配列を使用し、結果的にターゲットのmRNAの分解を起こすよう設計されています。

BLOCK-iT miR RNAi expression systemを使用する場合、Promoterはいくつか選ぶことができるのですか?

BLOCK-iT miR RNAi expression systemに含まれるBLOCK-iT miR RNAi expression vectorsはGATEWAY対応のベクターでCMV Promoterを持っています。もしCMV以外のベクターを使用したい場合には、GATEWAYシステムを利用して簡単に組換えすることができます。
EF-1alphaやUbc PromoterをもつGATEWAY Destination Vectorがあり、これらのベクターにてmiRNAの発現をすることができます。
MultiSite Gateway® Technology vectorを使用すれば、組織特異的なPromoterを使用してmiRNAの発現をすることもできます。

引用および参考文献 (1)

引用および参考文献
Abstract
Manganese superoxide dismutase induces p53-dependent senescence in colorectal cancer cells.
Authors:Behrend L, Mohr A, Dick T, Zwacka RM,
Journal:Mol Cell Biol
PubMed ID:16107721
The mitochondrial enzyme manganese superoxide dismutase (MnSOD) is known to suppress cell growth in different tumor cell lines. However, the molecular mechanism of this growth-retarding effect is not fully understood. Here we show that overexpression of MnSOD slows down growth of HCT116 human colorectal cancer cells by induction of cellular ... More