BLOCK-iT™ U6 RNAi Entry Vector Kit
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Invitrogen™

BLOCK-iT™ U6 RNAi Entry Vector Kit

BLOCK-iTM™ U6 RNAiエントリーベクターは、短いヘアピン RNA(shRNA)配列をクローニングするためのシンプルで合理的なアプローチを提供し、RNA干渉(RNAi)の一時的なトランスフェクションにおける検査を可能にします詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
K49450020構造
製品番号(カタログ番号) K494500
価格(JPY)
121,600
Each
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数量:
20構造
BLOCK-iTM™ U6 RNAiエントリーベクターは、短いヘアピン RNA(shRNA)配列をクローニングするためのシンプルで合理的なアプローチを提供し、RNA干渉(RNAi)の一時的なトランスフェクションにおける検査を可能にします。これは、遺伝子のダウンレギュレーション解析に最適な手法です。簡単なクローニングプロセスでは、U6 pol III型プロモーターのすぐ後に約50-bpのオリゴヌクレオチドDNAを配置します(図1)。このRNAiカセットの発現により、細胞内で処理され、RNAi効果を生成する短い干渉RNA(siRNA)として機能するshRNA分子が形成されます。

U6 RNAiカセットの導入
クローニングが完了すると、U6エントリーベクターは、Lipofectamine™ 2000などの試薬を使用した一過性トランスフェクションですぐに使用できるようになります。これにより、このシステムは多くの哺乳動物細胞タイプでの最初のshRNAスクリーニングに最適となっています。トランスフェクションが困難な細胞型や非分裂性の細胞型の代替として、または動物モデルシステムに導入するために、RNAiカセットをBLOCK-iT™ Viral RNAiベクターに簡単に組み換えることができます。安定したshRNAレンチウイルスの導入と発現のために、BLOCK-iT™ U6エントリーベクターをpLenti6/-iT™ RNAiベクターと組み換えてください。アデノウイルス形質導入を使用して困難な細胞型に一過性で導入する場合は、pad/bLOCK-iT™ RNAiベクターと組み換えてください。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
クローニング法Gateway™
構成または誘導システム構造的
供給タイプTransfection
製品ラインBLOCK-iT
製品タイプRNAi Entry Vector Kit
数量20構造
RNAiタイプshRNA
ベクターBLOCK-iT RNAi ベクター
フォーマットキット
プロモーターU6
Unit SizeEach
組成および保存条件
BLOCK-iT™ U6エントリーベクターキットには、2つのボックスが含まれています。クローニングボックスには、5 ng/チューブで線形化されたベクターの4つのチューブが含まれており、各チューブは5つのクローニング反応を完了させるのに十分です。また、250 µL 10Xアニーリングバッファー 、20 µL T4 DNAリガーゼ、80 µL 5X DNAリガーゼバッファー、1.4 ng lacZコントロールオリゴ、10µL凍結乾燥lacZコントロールプラスミド、1.5 mL DNase/RNase不含水、各2 µgのフォワードおよびリバースシーケンシングプライマーも含まれています。ベクター、バッファー、コントロールオリゴ、プラスミド、水、およびシーケンシングプライマーは、 -20℃で保存してください。One Shot™のボックス には、One Shot™ TOP10ケミカルコンピテント大腸菌、S.O.C.培地、pUC19スーパーコイル制御プラスミドの50µ Lのアリコート20個を含む形質転換試薬が含まれています。-80℃で保存してください。すべての試薬は、適切な保管条件であれば、6カ月間安定していることが保証されています。

よくあるご質問(FAQ)

BLOCK-iT miR RNAi expression systemは他の同様のシステムと比べて、どのようなメリットがありますか?

BLOCK-iT miR RNAi expression systemでは、CMV、Ubc、組織特異的なPromoter、誘導型Promoter等 幅広いPolII系Promoterを使用することができます。またこのシステムを使用すれば、一つのベクターに複数の配列を導入することもできます。結果、一つのPlasmidで複数位置や遺伝子をターゲットにKnockdownすることができます。また更なるメリットとしては、GFPつきのmiRNA expression vectorを使用すれば、GFPの発現にて、Transfection効率がモニターすることができます。 下記をご参照ください。 https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/rnai/vector-based-rnai/pol-ii-mir-rnai-vectors.html

BLOCK-iT miR RNAi expression systemで複数の遺伝子や位置をターゲットにすることができますか?

はい、miRNA cloning vectorは複数のmiRNA配列をつなげることが簡単にできるようになっています。これにより、おなじmiRNA配列をつなげて、転写量を上げたり、複数のシークエンスをつなげて一緒に転写させることが可能です。

BLOCK-iT miR RNAi Expression Kitはアデノウイルスのキットを互換性ありますか?

はい、miR miRNA vectorsはGateway®のクローニングに対応しています。そのため、miR miRNA expression cassette はGateway®対応のウイルスのベクターに組換えすることができます。

BLOCK-iT miR RNAi Kitはどのような機構でKnockdownを行いますか?特定のターゲットmRNAを分解しますか?それとも抑制するだけですか? また、このシステムで内在性のmiRNAの解析もできますか?

miRNA vectorは、内在性miRNAの機構を使用して、特定のターゲット遺伝子をKnockdownします。しかしながら、内在性のmiRNAへの使用については、弊社では、検討しておりません。
内在性miRNAは、一般的にターゲットと100%のホモロジーを持っておらず、転写の抑制を誘導します。弊社の製品は、ターゲットと100%一致する配列を使用し、結果的にターゲットのmRNAの分解を起こすよう設計されています。

BLOCK-iT miR RNAi expression systemを使用する場合、Promoterはいくつか選ぶことができるのですか?

BLOCK-iT miR RNAi expression systemに含まれるBLOCK-iT miR RNAi expression vectorsはGATEWAY対応のベクターでCMV Promoterを持っています。もしCMV以外のベクターを使用したい場合には、GATEWAYシステムを利用して簡単に組換えすることができます。
EF-1alphaやUbc PromoterをもつGATEWAY Destination Vectorがあり、これらのベクターにてmiRNAの発現をすることができます。
MultiSite Gateway® Technology vectorを使用すれば、組織特異的なPromoterを使用してmiRNAの発現をすることもできます。

引用および参考文献 (2)

引用および参考文献
Abstract
RNAi specificity: how big of an issue is it?
Authors:Samarsky DA, Welch PJ,
Journal:Pharmacogenomics
PubMed ID:15723598
RNAi techniques hold great promise for science, from basic research all the way to human therapeutics, and our understanding of the underlying mechanisms have allowed us to design better and more effective compounds. Fortunately, much has also been learned about nonspecific effects, such as off-target and stress responses. These observations and discoveries have led us to improved specificity ... More
Corepressors selectively control the transcriptional activity of PPARgamma in adipocytes.
Authors:Guan HP, Ishizuka T, Chui PC, Lehrke M, Lazar MA,
Journal:Genes Dev
PubMed ID:15681609
Peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARgamma) is the master regulator of adipogenesis as well as the target of thiazolidinedione (TZD) antidiabetic drugs. Many PPARgamma target genes are induced during adipogenesis, but others, such as glycerol kinase (GyK), are expressed at low levels in adipocytes and dramatically up-regulated by TZDs. Here, we ... More