Invitrogen™

pLenti6.3/V5™-TOPO™ TA Cloning™ Kit

製品番号（カタログ番号）	数量
K531520 または、製品番号K5315-20	1 kit

製品番号（カタログ番号） K531520

または、製品番号K5315-20

価格（JPY）

477,000

1 kit

Invitrogen™ pLenti6.3⁄V5™-TOPO™クローニングキットは、ViraPower™ HiPerform™レンチウイルス発現システム（カタログ番号K5310-00）の一部です。

pLenti6.3⁄V5™-TOPO™-TAクローニングキットには、TOPO™に適応したViraPower™ HiPerform™レンチウイルス発現ベクターであるpLenti6.3⁄V5™-TOPO™が含まれており、哺乳類の分裂および非分裂細胞中のターゲット遺伝子の迅速なPCRベースクローニングや高レベル発現に使用できます。pLenti6.3⁄V5™-TOPO™ベクターは、そのグレードをHiPerform™ベクターに高める2つの重要な遺伝的要素を備えています。それは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（WPRE）と、HIV-1インテグラーゼ遺伝子のセントラルポリプリン配列（cPPT）です。そのため、これらの要素を持たないベクターよりもタンパク質発現が少なくとも4倍増加します。

利点
• 安定した発現
• 長期実験
• 活性化ウイルスの正確な力価
• 3ステップのシンプルな手順により、5分で高効率にTOPO™ PCRクローニングを実施

主な特長
• HiPerform™ WPREおよびcPPTエレメント
• CMVプロモーター
• C末端のV5エピトープタグ
• ブラストサイジンによる選択

キットの内容
• ポジティブコントロール用のlacZベクター、pLenti6.3⁄V5-GW⁄lacZ™
• Stbl3™コンピテントセル

研究目的にのみ使用できます。あらゆる治療もしくは診断用には使用できません。

研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。

細胞タイプコンピテントセル

クローニング法TOPO-TA

構成または誘導システム構造的

供給タイプレンチウイルス

発現システムViraPower™ HiPerform™レンチウイルス発現システム

使用対象（アプリケーション）タンパク質発現

主機能ウイルス発現

製品ラインHiPerform、TOPO、ViraPower

製品タイプCloning Kit

プロモーターCMV

タンパク質タグV5エピトープタグ

数量1 kit

選択剤（真核生物）ブラストサイジン

選択マーカープロモーターSV40プロモーター

ベクターpLenti、TOPO-TAベクター

フォーマットキット

Unit SizeEach

組成および保存条件

TOPO™ TAクローニング試薬（ボックス1）
pLenti6.3？V5™-TOPO™（5-10 ng⁄µL）：20 µL、-20℃
pLenti6.3⁄V5-GW⁄lacZ™ コントロールベクター（0.5 µg⁄µL）：20 µL、-20℃
10X PCRバッファー：100 µL、-20℃
dNTPミックス：10 µL、-20℃
塩類溶液：50 µL、-20℃
CMVフォワードプライマー（100 ng⁄µL）：20 µL、-20℃
V5（C末端）リバースプライマー（100 ng⁄µL）：20 µL、-20℃
コントロールPCRテンプレート（50 ng⁄µL）：10 µL、-20℃
コントロールPCRプライマー（100 ng⁄µL）：10 µL、各-20℃
滅菌水：1 mL

One Shot™ Stbl3™化学的大腸菌コンピテントセル（ボックス2）
Stbl3™セル：21 x 50 µL、-80℃
pUC19コントロールDNA（10 pg⁄µL）：50 µL、-80℃
S.O.C.培地：6 mL、-80℃

よくあるご質問（FAQ）

Can I store my competent E. coli in liquid nitrogen?

We do not recommend storing competent E. coli strains in liquid nitrogen as the extreme temperature can be harmful to the cells. Also, the plastic storage vials are not intended to withstand the extreme temperature and may crack or break.

How should I store my competent E. coli?

We recommend storing our competent E. coli strains at -80°C. Storage at warmer temperatures, even for a brief period of time, will significantly decrease transformation efficiency.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

Does Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity enzyme mix leave 3' A-overhangs on the PCR product for subsequent cloning into a TOPO TA or original TA vector?

Yes, the enzyme mix leaves 3' A-overhangs on a portion of the PCR products. However, the cloning efficiency is greatly decreased compared to that obtained with Taq polymerase alone. It is recommended to add 3' A-overhangs to the product for TA cloning.

View all pLenti6.3/V5™-TOPO™ TA Cloning™ Kit FAQs