Expressway™Lumio™ Expression and Detection System, without vector

Expressway™ Lumio™ Expression and Detection Systemでは、小さな6つのアミノ酸配列（Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys）を利用します。Lumio™検出試薬は詳細を見る

製品番号（カタログ番号）	数量
K990060	1 kit

製品番号（カタログ番号） K990060

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1 kit

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Expressway™ Lumio™ Expression and Detection Systemでは、小さな6つのアミノ酸配列（Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys）を利用します。Lumio™検出試薬は、高い特異性と親和性で認識配列を結合するため、蛍光シグナルが明るくなり、リアルタイムのタンパク質生成分析と即時のゲル内タンパク質検出が可能になります。さらに、SlyD変異体に由来するExpresswayの特別な大腸菌ライセートは、Lumio™ Green Detection試薬の内在性SlyDタンパク質との非特異的結合を排除し、組換えタンパク質の検出に最適なバックグラウンドを提供します(図1)。Lumio™ Green Detection Kitは、タンパク質合成のリアルタイム検出と容易なゲル内のタンパク質検出のためにシステムに含まれています。Lumio™ベクター（図2および3）には以下の特長もあります。

• attR部位であって、attL側Gateway™エントリーベクターで効率的に組み換えを行うためのもの
• TEV切断部位があるN末端Lumio™タグ（pEXP3-DESTベクター）であって、精製後のLumio™配列の効率的な除去のためのもの
• C末端Lumio™タグ（pEXP4-DESTベクター）であって、ゲル内での簡単な即時検出のためのもの
• T7プロモーター、リボソーム結合部位、および無細胞タンパク質発現のためにスペースが最適化されたT7ターミネーター

研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。

検出位置ゲル内検出

発現タンパク質タイプ水可溶性タンパク質

発現メカニズム無細胞発現

発現システムセルフリー

製品タイプLumio Expression and Detection System

数量1 kit

製品ラインExpressway、Lumio, Lumio

Unit SizeEach

組成および保存条件

Expressway™ Lumio™ Expression and Detection Systemには、E. coli slyD-抽出物、2.5X IVPS大腸菌反応バッファー、T7 酵素ミックス、フィードバッファー、19アミノ酸ミックス、メチオニン、コントロールプラスミド、DNAse/RNaseフリーの水、および20回のリアルタイム反応または100のゲル内のアプリケーション用のLumio Green Detection Kitが含まれています。これらの成分に加えて、N-term Expressway™ Lumio™ kitには、6µgのpEXP3-DESTベクター、6 µgのpEXP4-DESTベクターのC-term Expressway™ Lumio kitも含まれています。ベクターと検出試薬を-20℃で保管してください。その他のすべてのコンポーネントは-80℃で保存。適切に保存した場合、6カ月間安定しています。

よくあるご質問（FAQ）

I accidentally stored my E. coli slyD-Extract, E. coli Reaction Buffer (-A.A.), and 2X feed buffer at room temperature. Can I still use them?

Unfortunately, this may result in a loss of activity.

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I've run out of the T7 RNA polymerase for my cell-free expression. What do you suggest I use?

We would recommend using T7 RNA polymerase (Cat. No. 18033019, 50 U/µL). Use 1-1.5 µL in a 50 µL reaction system.

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I'm getting smearing after running my cell-free expression reaction on a gel.. What could be the cause of this?

Smearing may occur if samples for the following reasons:

- Samples were not precipitated with acetone: precipitate proteins with acetone to remove background smearing.
- Too much protein was loaded: reduce the amount used.
- The gel itself was not clean: rinse the gel briefly before exposing to film.
- Ethanol was present in the protein synthesis reaction: make sure that any residual ethanol is removed during DNA purification.
- Check the date of your pre-cast gels: do not use gels after the expiration date.

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I'm seeing a ladder of small-sized products after running my reaction on a gel when using the Expressway system. Why is this?

There may be several reasons for why this is occurring. The most common are: proteolysis, degradation of DNA and/or RNA templates (truncated templates will generate truncated protein products), internal initiation (if there are many methionines and internal RBS-like sequences in the gene, the ribosome may initiate translation from the wrong methionine), premature termination, translational pausing, frequent rare codon usage, complicated secondary structure of RNA, and others. This can also happen if proteins are denatured for too long, or not enough SDS was added to the 1X SDS-PAGE sample buffer.

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With a cell-free expression system, I'm getting good protein yield, but it has low biological activity. What can I do?

- Your protein may not be folding properly: try to reduce the incubation temperature to as low as 25 degrees C during synthesis.
- You may require post-translational modification of your protein: the Expressway system will not introduce post-translational modifications to the recombinant protein.
- Your synthetic protein may require co-factors for complete activity: try adding required co-factors to the protein synthesis reaction.

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