Expressway™ Maxi Cell-Free E. coli Expression System

Citations & References (2)

Invitrogen™

Expressway™ Maxi Cell-Free E. coli Expression System

Expressway™ Maxi Cell-Free E. coli Expression Systemでは、効率的な結合転写／トランスレーション反応を使用して、4～6時間でミリグラム単位の可溶性の機能的に活性なタンパク質を生成します。この手順では詳細を見る

製品番号（カタログ番号）	数量
K990097	1 Kit

製品番号（カタログ番号） K990097

価格（JPY）

251,700

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Ends: 26-Dec-2025

419,600

割引額 167,900 (40%)

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1 Kit

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Expressway™ Maxi Cell-Free E. coli Expression Systemでは、効率的な結合転写／トランスレーション反応を使用して、4～6時間でミリグラム単位の可溶性の機能的に活性なタンパク質を生成します。この手順では、特別な機器を必要とせず、シングル反応チューブで実行でき、簡単に拡張できます。TOPO TAクローニング™発現ベクター（95 %の効率で5分間のクローニング）は、最適な発現結果のために提供されています。オープン発現システムのすべての利点に加えて、Expressway™ Maxiテクノロジーでは、さまざまなダウンストリームアプリケーションのために簡単に検出および精製できる高レベルの組換えタンパク質を生成するための手段を提供します。

4～6時間以内でのミリグラムレベルのタンパク質生成
Expressway™ Maxiテクノロジーの特長は、フィードバッファーの独自の組成により、反応の生産性が向上し、4～6時間以内に2 mLの反応で1ミリグラムを超えるタンパク質が生産されることです（図1）。ライセートの組成により、円形または線形のテンプレートを使用したタンパク質合成が可能になります。

ハイスループット（HTP）に対応
このシステムは、HTP発現用にも設計されています。1つのキットは200 x 50の-反応に最適で、2 x 96のウェルプレートに対応できます。フィードバッファーなしで、このような反応に必要な時間はわずか2時間です。ポジティブ発現が検出されると、タンパク質のスケールアップを大規模なExpressway™無細胞形式またはE. Coli細胞ベースのシステムで行えます。

最適化されたベクター
pEXP5 TOPO™ TAベクターは、Expressway™ Milligramシステムでの使用に最適化されています（図2）。これらは、天然タンパク質フォールディングおよび機能性に干渉する可能性がある追加のアミノ酸配列を最小限に抑えるように設計されています。これらのベクターの特長は以下のとおりです。

• pEXP5-NT/TOPO™発現ベクターはN末端ヒスチジンタグとTEVプロテアーゼ認識部位を提供します

• pEXP5-CT/TOPO™発現ベクターは、C末端ヒスチジンタグでのタンパク質発現、または目的の遺伝子の末端での停止コドンの導入による天然タンパク質発現に使用できます

シンプルかつ高速な手順
Expressway™ Maxi Cell-Free Expression Systemは、最適な無細胞タンパク質の生成に必要なすべての成分を提供します。このシステムには、大腸菌抽出物、IVPS反応バッファー、フィードバッファー、T7酵素ミックス、19アミノ酸ミックス、およびメチオニンの個々のチューブが含まれています。2 mlの反応を開始するには、反応バッファー、19 アミノ酸ミックス、標識または非標識のメチオニンとシステイン、T7酵素ミックス、およびDNAテンプレート（T7プロモーターあり）を大腸菌抽出物と混合します。30分間のインキュベーション後、フィードバッファーを追加します。ミリグラムレベルの活性タンパク質が4～6時間以内に合成されます。HTP発現を行うには、あらかじめすべての成分とアリコートをHTP形式に混合しておくだけです。

研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。

発現タンパク質タイプ水可溶性タンパク質

発現メカニズム無細胞発現

発現システムセルフリー

製品タイプCell-Free Expression System

数量1 Kit

ベクターpEXP5-NT/TOPO、pEXP5-CT/TOPO

クローニング法TOPO™-TA

製品ラインExpressway

プロモーターT7

タンパク質タグN-末端

Unit SizeEach

組成および保存条件

Expressway™ Maxi Cell-Free Expression Systemは、必要に応じて、25-μlを200回、1-mlを5回、5 ml（初期容量）を1回の反応、もしくは1回または複数回行うように設計されています。このシステムには、E. coli slyD-抽出物、2.5X IVPS反応バッファー、フィードバッファー、19アミノ酸ミックス、メチオニン、DNase/RNaseフリーの水、T7酵素ミックス、およびポジティブ発現コントロールベクターが含まれます。EXP5-NT/TOPO™およびpEXP5-CT/TOPO™を備えたExpressway™ Maxi Cell-Free E. coli Expression Systemには、pEXP5-NT/TOPO™およびpEXP5-CT/TOPO™ TA Expression Kitも含まれています。各キットには、pEXP5-NT/TOPO™ベクターまたはpEXP5-CT/TOPO™ベクター、TOPO™クローニングを容易にするその他の試薬、およびOne Shot™ TOP10ケミカルコンピテント大腸菌が含まれています。ベクターを-20℃で保管してください。その他のすべてのコンポーネントは-80℃で保存。適切に保存した場合、6カ月間安定しています。

よくあるご質問（FAQ）

I accidentally stored my E. coli slyD-Extract, E. coli Reaction Buffer (-A.A.), and 2X feed buffer at room temperature. Can I still use them?

Unfortunately, this may result in a loss of activity.

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I've run out of the T7 RNA polymerase for my cell-free expression. What do you suggest I use?

We would recommend using T7 RNA polymerase (Cat. No. 18033019, 50 U/µL). Use 1-1.5 µL in a 50 µL reaction system.

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I'm getting smearing after running my cell-free expression reaction on a gel.. What could be the cause of this?

Smearing may occur if samples for the following reasons:

- Samples were not precipitated with acetone: precipitate proteins with acetone to remove background smearing.
- Too much protein was loaded: reduce the amount used.
- The gel itself was not clean: rinse the gel briefly before exposing to film.
- Ethanol was present in the protein synthesis reaction: make sure that any residual ethanol is removed during DNA purification.
- Check the date of your pre-cast gels: do not use gels after the expiration date.

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I'm seeing a ladder of small-sized products after running my reaction on a gel when using the Expressway system. Why is this?

There may be several reasons for why this is occurring. The most common are: proteolysis, degradation of DNA and/or RNA templates (truncated templates will generate truncated protein products), internal initiation (if there are many methionines and internal RBS-like sequences in the gene, the ribosome may initiate translation from the wrong methionine), premature termination, translational pausing, frequent rare codon usage, complicated secondary structure of RNA, and others. This can also happen if proteins are denatured for too long, or not enough SDS was added to the 1X SDS-PAGE sample buffer.

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With a cell-free expression system, I'm getting good protein yield, but it has low biological activity. What can I do?

- Your protein may not be folding properly: try to reduce the incubation temperature to as low as 25 degrees C during synthesis.
- You may require post-translational modification of your protein: the Expressway system will not introduce post-translational modifications to the recombinant protein.
- Your synthetic protein may require co-factors for complete activity: try adding required co-factors to the protein synthesis reaction.

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引用および参考文献 (2)

引用および参考文献

Abstract

Fox-2 splicing factor binds to a conserved intron motif to promote inclusion of protein 4.1R alternative exon 16.

Authors:Ponthier JL, Schluepen C, Chen W, Lersch RA, Gee SL, Hou VC, Lo AJ, Short SA, Chasis JA, Winkelmann JC, Conboy JG,

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:16537540

'Activation of protein 4.1R exon 16 (E16) inclusion during erythropoiesis represents a physiologically important splicing switch that increases 4.1R affinity for spectrin and actin. Previous studies showed that negative regulation of E16 splicing is mediated by the binding of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein (hnRNP) A/B proteins to silencer elements in the ... More

X-ray structure of the EmrE multidrug transporter in complex with a substrate.

Authors:Pornillos O, Chen YJ, Chen AP, Chang G,

Journal:Science

PubMed ID:16373573

EmrE is a prototype of the Small Multidrug Resistance family of efflux transporters and actively expels positively charged hydrophobic drugs across the inner membrane of Escherichia coli. Here, we report the x-ray crystal structure, at 3.7 angstrom resolution, of one conformational state of the EmrE transporter in complex with a ... More