BACE1 (β-Secretase) FRET Assay Kit, red

BACE1（β-セクレターゼ）は、アルツハイマー病（AD）の細胞外アミロイドプラークに見られるアミロイドβペプチド（Aβ）の産生に関与する重要な酵素です。一部の症例では、家族性ADの早期発現が、アミロイド前駆体タンパク質（APP）のスウェーデン変異に起因する可能性があります。スウェーデン変異は、このタンパク質を切断するBACE1の著しい亢進を引き起こすものです。これに加え、その他の遺伝的および病理学的エビデンスに基づき、BACE1、およびAPP切断に関わる他の酵素（γセクレターゼなど）の阻害に焦点を当てた治療方法が開発されています。BACE1蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）アッセイキットは、BACE1の阻害剤候補物質をスクリーニングするための、高感度で効率性の高い手法を提供します。このキットでは、精製したバキュロウイルス発現BACE1、およびスウェーデン変異体に基づく新しい赤色FRETペプチド基質を使用します。

BACE1 FRETアッセイキットの特長：

•化合物の干渉を減少する赤色発光
• 励起波長545 nm、測定蛍光波長585 nm
• 溶液中で行う、簡単で迅速なホモジニアスアッセイ
• ハイスループットスクリーニング用の多用途フォーマット
• 最大24時間測定可能な、安定した結果の獲得

BACE1 FRETアッセイの原理：ペプチド基質は、蛍光ドナーであるローダミン（Rh）誘導体、独自の消光性アクセプターの2つの蛍光色素分子を含めて合成されます。光励起が起こると、共鳴エネルギー移動と呼ばれる量子力学現象により、ドナー（D）の発する蛍光エネルギーがアクセプター（A）によって有意に消光されるように、これら2群間の距離が選択されています（図1）。プロテアーゼによる切断が生じると、蛍光色素分子は消光群から分離され、ドナーの蛍光収量が完全に回復します。つまり、酵素の切断があると、弱い蛍光性のペプチド基質が強い蛍光を持つようになります。蛍光強度の増加は、タンパク質分解率に直線的に相関しています。

BACE1酵素の内容：
：細胞外ドメインに相当して、ヒトBACE1のアミノ酸1～460をエンコードするcDNA配列を、組換えバキュロウィルス感染した昆虫細胞内で発現しました。精製されたBACE1は、見かけ分子量が55 kDa、N末端配列がTQHGIRLPLRとなるproBACE1型として存在します。