pTZ19R DNA

Thermo Scientific pTZ19R/Uは長さ2862 bpの小さなファージミドです。ファージf1遺伝子間領域（IG）のDNAをpUC19に挿入し、pUC19のMCSの近くにT7プロモーター配列を挿入することで構築されています。ファージミドは、クローニングされたf1 IG領域の向きが異なります。DNAクローニング、ジデオキシDNAシーケンシング、in vitro突然変異生成、in vitro転写を1つのシステム実施できるように設計されています。これらのファージミドを含む宿主株は、ヘルパーファージM13K07に重複感染した場合、一本鎖DNAを産生します。

特長

• 大腸菌（dam+、dcm+）から単離
• 超らせん型のものが90%を上回る
• 大腸菌（dam+、dcm-）から単離
• DNA配列、配列解析、およびマップ作成については、無料のREviewerオンラインツールをご覧ください。

アプリケーション

• クローニング
• インサートDNAのin vitro転写のシーケンシング

pTZ19Rの内容と使用上の注意 - pTZ19R/Uファージミドの内容：
• ファージミドを複製するpMB1レプリコンrep（ソース – プラスミドpUC19）
• β‐ラクタマーゼのコード化を行うbla遺伝子。アンピシリンに対する耐性を与えます（ソース – プラスミドpUC19）
• 大腸菌のlacオペロン領域は、CAPタンパク質結合部位、プロモーターP_lac、lacリプレッサー結合部位、およびlacZ遺伝子の5’-末端部を含み、β-ガラクトシダーゼのN末端フラグメントをコード化します（ソース – pUC19）このフラグメントにより、pUC18/19セクションの説明と同じ方法で、組換えファージミドの青／白コロニースクリーニングが可能になります
• pUC19のMCSの近くに挿入されたT7プロモーター。大量の特異性RNAのin vitro合成を可能にします
• ファージf1 DNA合成（プラス鎖およびマイナス鎖）の開始および終了のcis、およびバクテリオファージ粒子へのDNAのパッケージングに必要なファージf1遺伝子間領域

一本鎖（プラス）DNAの合成には、ファージコード化された遺伝子II、X、およびVタンパク質が必要です。DNA合成はオリ（+）で開始され、指示された方向に進みます。プラスDNA鎖を二本鎖DNAに変換する場合、ファージ遺伝子は必要ありません。DNA合成は、宿主のRNAポリメラーゼによって合成された、30-ヌクレオチドRNAプライマーによって開始され、オリ（-）から始まります。

このマップは、pTZ19R DNAを1回切断する酵素を示しています。Thermo Scientificが製造した酵素はオレンジ色で示されています。座標は、各認識配列における最初のヌクレオチドの位置を示します。

遺伝因子の正確な位置をマップに示します（終止コドンを含む）。シグナルペプチドのbla遺伝子ヌクレオチド2732-2664（相補鎖）コード。wt β-ガラクトシダーゼに対応し、青／白コロニースクリーニングに不可欠なLacZポリペプチドは、nt位置458（相補鎖）で終了します。LacZ読み取りフレーム内の残りのアミノ酸は、f1 DNAによってコード化されています。示されているrep領域は、複製を促進するのに十分です。DNA複製は、相補DNA鎖の1112（± 1）の位置で開始し、指示された方向に進みます。pMB1およびColE1レプリコンを持つプラスミドは相互に適合しませんが、p15Aレプリコン（pACYC177、pACYC184）を持つプラスミドは完全に適合します。pMB1由来のプラスミドは、クロラムフェニコールを使用して増幅できます。