Dead Cell Apoptosis Kits with Annexin V for Flow Cytometry
Dead Cell Apoptosis Kits with Annexin V for Flow Cytometry
Invitrogen™

Dead Cell Apoptosis Kits with Annexin V for Flow Cytometry

Annexin VおよびAlexa Fluor 488、FITC、PI、PE、APC、SYTOX Greenなどのコンジュゲート蛍光色素を使用したDead Cell Apoptosisキットで細胞生存率を評価します。
製品番号(カタログ番号)数量標識または色素
V1324150 AssaysAlexa Fluor 488, Propidium Iodide
V132421 KitFITC, Propidium Iodide
V351121 KitSYTOX Green, R-PE
V351131 KitSYTOX Green, APC
V13245250 AssaysAlexa Fluor 488, Propidium Iodide
製品番号(カタログ番号) V13241
価格(JPY)
66,200
50 assays
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数量:
50 Assays
標識または色素:
Alexa Fluor 488, Propidium Iodide
Alexa Fluor 488、FITC、ヨウ化プロピジウム、PE、APC、SYTOX GreenなどのAnnexin Vコンジュゲートを備えたDead Cell Apoptosisキットを使用すると、フローサイトメトリーにて生細胞、死細胞、アポトーシス細胞を簡単に識別できます。こうしたコンジュゲートは、生細胞、死細胞、またはアポトーシス細胞を異なる色素で識別するため、マルチパラメトリック解析を用いた細胞生存率およびアポトーシスの評価に不可欠です。
細胞生存率をアッセイするために、アネキシンVを用いたDead Cell Apoptosisキットをフローサイトメトリーで使用することには、いくつかの利点があります:

優れた輝度
タンパク質濃度や精製レベルが低い他のアネキシンVキットとは異なり、Annexin V Alexa Fluor 488コンジュゲートはフローサイトメトリー用に最適化されており、アポトーシスを起こしている細胞と生細胞の間を最大限に分離します。Alexa Fluor 488色素は、フルオレセイン(FITC)に類似したスペクトルを持つ優れたグリーン蛍光色素です。

高結合効率
アネキシンVコンジュゲートは、高純度のcys-アネキシンから作製されており、高い結合効率を実現し、アポトーシスプロセスの非常に高精度な特性評価を実現します。

マルチパラメーター
多くの出版物では、細胞がアポトーシスであることを特定するために、少なくとも2つの方法が必要です。このマルチパラメーターキットは、細胞膜の細胞質表面にあるホスファチジルセリン(PS)を検出するほか、ヨウ化プロピジウムを介して膜の完全性を評価します。

Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V Alexa Fluor 488 & PI
Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V Alexa Fluor 488 & Propidium Iodide(PI)(V13241, V13245)は、フローサイトメトリーでリンファチジルセリン(PS)の発現および膜透過性を検出することにより初期アポトーシスを測定するために使用されます。細胞をアネキシンVおよびヨウ化プロピジウムで染色する場合、PSを発現するアポトーシスを起こしている細胞は、FITCチャンネル、低レベルの赤色蛍光で検出可能な緑色蛍光を示します。死細胞または壊死細胞は明るい赤色蛍光を示し、緑色蛍光は示しませんが、生細胞は緑色蛍光も赤色蛍光も示しません。

Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V PE and SYTOX Green
Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V PE and SYTOX Greenは、オレンジ色の蛍光フィコビリプロテインR-PEに結合した組み換えアネキシンVを使用したフローサイトメトリーでアポトーシス細胞のPS外在化を検出し、死細胞はSYTOX Green核酸染色剤で検出します。両方のプローブで処理した後、アポトーシスを起こしている細胞はオレンジ色蛍光を示し、死細胞は緑色の蛍光を示し、生細胞は蛍光をほとんど示さないか、まったく示しません。これらの集団は、488 nmのレーザーフローサイトメーターを使用して、530/30 nmおよび585/42 nmのバンドパスフィルターで簡単に識別できます。

Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V APC and SYTOX Green
Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V APC and SYTOX Greenは、赤色レーザー励起アロフィコシアニンに結合した組み換えアネキシンVを用いて、フローサイトメトリー中のアポトーシス細胞におけるPSの外部化を検出し、SYTOX Green核酸染色剤を用いて死細胞を検出します。アポトーシス細胞は、外部化PSに結合するアネキシンVによって検出されます。生細胞は蛍光をほとんどまたはまったく示さず、アポトーシス細胞は赤色蛍光とごくわずかな緑色蛍光を示し、後期アポトーシス細胞は赤色とオレンジ色の蛍光をより高いレベルで示します。これらの集団は、633 nmと488 nmの励起源(アルゴンイオンレーザーとHeNeレーザー)の両方を備えたフローサイトメーターを使用して簡単に識別できます。

Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V FITC and PI
Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V FITC and PIは、緑色蛍光FITC色素に結合した組み換えアネキシンVを使用してアポトーシス細胞のPS外在化を検出し、PIを使用して死細胞を検出します。PIで染色する壊死性細胞は赤色蛍光を示します。両方のプローブで処理した後、アポトーシスを起こしている細胞は緑色蛍光を示し、死細胞は赤色と緑色の蛍光を示し、生細胞は蛍光をほとんど示さないか、まったく示しません。

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
仕様
概要Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V Alexa Fluor 488&ヨウ化プロピジウム(PI)
励起/発光499、535/521、617
フローサイトメーターレーザーライン488
使用対象 (装置)蛍光顕微鏡、フローサイトメーター
キット内容1バイアルのアネキシンV、Alexa Fluor 488コンジュゲート(250 μL)、1バイアルのヨウ化プロピジウム(PI、100 μL)、および1ボトルのアネキシン結合バッファー(5倍の溶液、15 mL)を含みます。
標識または色素Alexa Fluor 488, Propidium Iodide
製品タイプアポトーシス検出キット
数量50 Assays
出荷条件湿氷
Unit Size50 assays
組成および保存条件
冷蔵庫(2℃~8℃)に保存し、遮光してください。

よくあるご質問(FAQ)

When using Dead Cell Apoptosis Kits with Annexin V for Flow Cytometry, what does a PI+ only population (hence Annexin V negative) correspond to?

These products are cells that died without undergoing apoptosis. A PI+ only population could be either a result of experimental condition or sample preparation.

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I trypsinized my adherent cells and labeled with annexin V, and now my flow data is showing a high percentage of apoptotic cells even for control, untreated cells. What is the problem?

Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. Allow the cells to recover for about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium after trypsinizing/scraping so that they can recover their membrane integrity before staining. For lightly adherent cell lines, such as HeLa and NIH 3T3, another option is to use non-enzyme treatments like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I detect annexin V staining in an imaging assay?

Annexin V staining is not typically used in imaging experiments; it is a better reagent for flow cytometry analysis. All cells will stain to some extent, so it can be difficult to distinguish a relatively bright annexin V-stained cell from a dimmer non-apoptotic cell. Caspase activation, detected using our CellEvent Caspase 3/7 or Image-iT LIVE Caspase detection kits, is a better method for detecting apoptosis in an imaging assay.

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When should I stain adherent cells with annexin V for flow cytometric analysis? Before or after I trypsinize them?

Trypsinize first and then allow the cells to recover about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium before staining with annexin V conjugates. Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing for annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. For lightly adherent cell lines such as HeLa and NIH 3T3, you could use a less harsh (non-enzymatic) dissociation product like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I fix my cells after annexin V labeling?

Annexin V staining is best analyzed on live cells. If you need to fix your cells for analysis, then fix in 3.7% formaldehyde in PBS containing calcium and magnesium to maintain binding during fixation. The signal will not be retained after permeabilization, thus annexin V staining is not compatible with internal antibody labeling.

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引用および参考文献 (22)

引用および参考文献
Abstract
H2AX phosphorylation within the G1 phase after UV irradiation depends on nucleotide excision repair and not DNA double-strand breaks.
Authors:Marti TM, Hefner E, Feeney L, Natale V, Cleaver JE
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:16788066
'The variant histone H2AX is phosphorylated in response to UV irradiation of primary human fibroblasts in a complex fashion that is radically different from that commonly reported after DNA double-strand breaks. H2AX phosphorylation after exposure to ionizing radiation produces foci, which are detectable by immunofluorescence microscopy and have been adopted ... More
Aberrant T cell differentiation in the absence of Dicer.
Authors:Muljo SA, Ansel KM, Kanellopoulou C, Livingston DM, Rao A, Rajewsky K
Journal:J Exp Med
PubMed ID:16009718
'Dicer is an RNaseIII-like enzyme that is required for generating short interfering RNAs and microRNAs. The latter have been implicated in regulating cell fate determination in invertebrates and vertebrates. To test the requirement for Dicer in cell-lineage decisions in a mammalian organism, we have generated a conditional allele of dicer-1 ... More
Nuclear relocation of the nephrin and CD2AP-binding protein dendrin promotes apoptosis of podocytes.
Authors:Asanuma K, Campbell KN, Kim K, Faul C, Mundel P
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:17537921
'Kidney podocytes and their slit diaphragms (SDs) form the final barrier to urinary protein loss. There is mounting evidence that SD proteins also participate in intracellular signaling pathways. The SD protein nephrin serves as a component of a signaling complex that directly links podocyte junctional integrity to actin cytoskeletal dynamics. ... More
An anti-transferrin receptor-avidin fusion protein exhibits both strong proapoptotic activity and the ability to deliver various molecules into cancer cells.
Authors:Ng PP, Dela Cruz JS, Sorour DN, Stinebaugh JM, Shin SU, Shin DS, Morrison SL, Penichet ML
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:12149472
'We have developed an antibody fusion protein (anti-rat TfR IgG3-Av) with the ability to deliver different molecules into cancer cells. It consists of avidin genetically fused to the C(H)3 region of a human IgG3 specific for the rat transferrin receptor. It forms strong, noncovalent interactions with biotinylated molecules such as ... More
Protein kinase Cepsilon activates protein kinase B/Akt via DNA-PK to protect against tumor necrosis factor-alpha-induced cell death.
Authors:Lu D, Huang J, Basu A
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16785234
'We have previously shown that protein kinase Cepsilon (PKCepsilon) protects breast cancer cells from tumor necrosis factor-alpha (TNF)-induced cell death. In the present study, we have investigated if the antiapoptotic function of PKCepsilon is mediated via Akt and the mechanism by which PKCepsilon regulates Akt activity. TNF caused a transient ... More