Vybrant™ FLICA Caspase Apoptosis Assay Kits for flow cytometry

ポリカスパーゼ、カスパーゼ3および7用のVybrant FAMカスパーゼアッセイキットにより、フローサイトメトリーによるカスパーゼ媒介アポトーシスを迅速に検出できます。Vybrant FAMカスパーゼアッセイキットでは、カスパーゼ活性を検出しデータ報告するために、蛍光性カスパーゼ阻害剤（FLICA）手法を用います。特にこれらのカスパーゼアッセイキットには、遺伝子組み換えFLICA基質FAM-VAD-FMK（ポリカスパーゼ用）、FAM-DEVD-FMK（カスパーゼ-3/7用）、FAM-LETD-FMK（カスパーゼ-8用）が含まれています。また、Hoechst 33342およびヨウ化プロピジウム染色も含まれており、膜透過性とフローサイトメトリーによる細胞周期の同時評価も可能です。

フローサイトメトリー用のVybrant FAMカスパーゼアッセイキットは、活性カスパーゼを検出するための新しいアプローチを採用しています：この場合、アフィニティラベルであるFLICA手法を利用しています。このアフィニティラベルは、カスパーゼ特異的なアミン酸配列に、システインと共有結合反応するフルオロメチルケトン（FMK）部位を関連付けます。さまざまなアミノ酸認識配列を使用して、以下の各種カスパーゼを検出します：ポリカスパーゼ（カスパーゼ-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9を含む）用のバリン-アラニン-アスパラギン酸（VAD）、カスパーゼ-3/7用アスパラギン酸-グルタミン酸-バリン-アスパラギン酸（DEVD）、カスパーゼ-8用ロイシン-グルタミン酸-スレオニン-アスパラギン酸（LETD）。カルボキシフルオレセイン（FAM）基がレポーターとして結合されます。

FLICA試薬は、認識配列を介して活性カスパーゼの酵素反応中心と相互作用し、FMK部分を介して共有結合すると考えられています。FLICA阻害剤は細胞透過性であり、細胞無毒性です。非結合FLICA分子は細胞外に拡散し、洗い流されます。残りの緑色蛍光シグナルは、阻害剤が添加された時点で存在していた活性カスパーゼの量を直接表す指標となります。FLICA、ヨウ化プロピジウム、Hoechst 33342試薬の励起ピークおよび発光ピークの概算値は、それぞれ488 nm/530 nm、535 nm/6,617 nm、350 nm/461 nmです。Vybrant FAM Polyカスパーゼアッセイ、カスパーゼ-3および-7アッセイ、カスパーゼ-8アッセイアポトーシスキットに含まれる検出試薬は、それぞれ488⁄530 FAM-VAD-FMK試薬、488/530 FAM-DEVD-FMKおよび488/530 FAM-LETD-FMKです。