SuperScript™ IV First-Strand Synthesis System
SuperScript™ IV First-Strand Synthesis System
Invitrogen™

SuperScript™ IV First-Strand Synthesis System

RT-PCR用SuperScript™ IV第一鎖合成システムは、精製されたポリ(A)+またはトータルRNAからの第一鎖cDNAの合成に最適化されています。このキットには、RT反応で堅牢かつ信頼性の高いcDNA合成を行う独自のMMLV変異体であるSuperScript™ IV逆転写酵素(RT)が含まれています詳細を見る
製品番号(カタログ番号)内容反応数
18091050Kit only50反応
18091200Kit only200反応
18091150Kit with ezDNase50反応
18091300Kit with ezDNase200反応
製品番号(カタログ番号) 18091050
価格(JPY)
113,400
Each
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内容:
Kit only
反応数:
50反応
一括またはカスタム形式をリクエストする
RT-PCR用SuperScript™ IV第一鎖合成システムは、精製されたポリ(A)+またはトータルRNAからの第一鎖cDNAの合成に最適化されています。このキットには、RT反応で堅牢かつ信頼性の高いcDNA合成を行う独自のMMLV変異体であるSuperScript™ IV逆転写酵素(RT)が含まれています。SuperScript™ IV合成システムは、阻害剤耐性、処理能力、反応速度においてSuperScript™ IIIベースのシステムよりも大幅に改善されていますが、熱安定性の向上、高効率の完全長cDNA合成、RNase活性の低減など、以前のシステムのすべての利点を保持しています。SuperScript™ IVは、現在市販されている他のRTが非効率的に機能する原因となる、多種多様なサンプルに含まれる阻害物質の存在下で、信頼性が高く、一貫性のある、高速なcDNA合成を実現するように設計されています。

SuperScript™ IV第一鎖合成システムは、RT反応に必要なすべてのコンポーネントに加えて、コントロール遺伝子とプライマーを追加しており、アプリケーションのニーズに合わせてRTセットアップを柔軟にカスタマイズすることができます。SuperScript™ IV合成システムは、RT-PCRアプリケーションの性能と柔軟性の点で最高の選択肢です。特に、再現性と信頼性が最重要課題となり、RNAサンプル中の阻害物質がcDNA合成に干渉し、遺伝子発現研究にバイアスを生じさせる可能性があるすべてのRT-PCRアプリケーション向けとして推奨します。

SuperScript™ IV第一鎖合成システムの特長は以下のとおりです。
•cDNA合成を妨げる可能性のあるさまざまな阻害剤に対する耐性を大幅に向上
•幅広いサンプルタイプにおける堅牢で特異的なcDNA合成
•インキュベーション時間を50分超から10分へ短縮する、より高速な逆転写酵素反応
•SuperScript™ III RTと比較して大幅に優れた処理能力

酵素ソース
M-MLVのpol遺伝子を発現している大腸菌から精製し、熱安定性と半減期、処理能力、阻害剤耐性を向上させ、RNase H活性を低減するように改良されています。

性能および品質検査
エンドデドキシリボヌクレアーゼ、エキソデオキシリボヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼアッセイ、およびcDNA生成物の収量と長さ。

単位の定義
SuperScript™ IV RTの1単位は、ポリ(A)オリゴ(dT)12-18をテンプレート/プライマーとして使用して、37℃で10分間に1 nmoleのデオキシリボヌクレオチドを酸沈殿性物質に組み込むために必要な酵素量です。

ユニットの反応条件
50 mM Tris-HCl(pH 8.3)、4 mM MgCl2、10 mM DTT、50 mM KCl、0.5 mM dTTP、0.4 MBq/mL [3H]-dTTP、0.4 mMポリ(A)オリゴ(dT)12~18および37℃で10分間おいた20 μL中の酵素。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
最終産物タイプcDNA(ファーストストランド)
フォーマットキット
内容Kit only
反応数50反応
最適反応温度50℃
数量50反応
反応形態分離コンポーネント
試薬タイプ逆転写反応試薬
逆転写酵素SuperScript™ IV
出荷条件ドライアイス
サイズ(最終製品)12.3 kb以下
原料RNA
技術Reverse Transcription
使用対象(アプリケーション)RT-PCR, Real Time PCR (qPCR)
GC-Rich PCR Performance
反応速度高速
Unit SizeEach
組成および保存条件
オリゴ(dT)20(50 ÂμM)、50 μL
ランダムヘキサマー(50 ng/ÂμL)、250 ÂμL
5X RTバッファー、1 mL
0.1 M DTT、250 ÂμL
10 mM dNTP ミックス、250 ÂμL
SuperScript™ IV RT(10,000 U/ÂμLで合計200ユニット)、50 ÂμL
リボヌクレアーゼ阻害剤(40 U/ÂμL)、100 ÂμL
E. coli RNase H(2 U/ÂμL)、50 ÂμL
DEPC処理水、1.2 mL
Total HeLa RNA(10 ng/ÂμL)、20 ÂμL
Senseコントロールプライマー(10 ÂμM)、25 ÂμL
Antisenseコントロールプライマー(10 ÂμM)、25 ÂμL

すべてのコンポーネントを-5~-30℃で保管してください。

よくあるご質問(FAQ)

Is it normal to see a band in the SuperScript IV First-Strand Synthesis System (Cat. Nos. 18091050, 18091200) "No Reverse Transcriptase (RT) Control"?

Yes. The SuperScript IV First-Strand Synthesis System (Cat. No. 18091050, 18091200) "No Reverse Transcriptase (RT) Control" will often display a level of amplification because of residual genomic DNA in the RNA preps. In general, you do not need to worry if a faint band shows up on a gel, as long as the intensity of the positive control is much higher.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

In your SuperScript IV RT protocols, there is no ezDNase inactivation step. Will active ezDNase affect RNA or the RT reaction?

The Invitrogen ezDNase Enzyme is a novel DNase that is highly specific for double-stranded DNA. It has no activity on single-stranded DNA in RT reactions (primers or probes), or on RNA. The enzyme is also thermolabile—it is inactivated quickly at temperatures typical for the SuperScript IV RT reaction (e.g., 50°C). The additional inactivation step is therefore not required in RT-qPCR applications.

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Which SuperScript IV RT format do you recommend for real-time PCR applications?

For RT-qPCR applications we recommend using the Invitrogen SuperScript IV VILO Master Mix (Cat. No. 11756050). The cDNA synthesis reaction setup with this master mix requires fewer pipetting steps and therefore reduces variation in the data. SuperScript IV RT, as a component of the master mix, offers the highest efficiency of cDNA synthesis step compared to competitors’ products.

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Are there any significant changes in the SuperScript IV RT protocol compared to the SuperScript III RT protocol?

The only change is that the incubation time for the reverse transcription reaction has been reduced from 50 minutes to 10 minutes. All the other parameters and steps are the same.

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Can I get comparable cDNA yield and length using the SuperScript IV RT 10-minute protocol as when using the 50-minute protocol for SuperScript III RT?

When compared with SuperScript III RT (and other manufacturers’ RTs) in a synthesis reaction for a 9 kb cDNA, SuperScript IV RT performed successful synthesis in just 10 minutes and did so with comparable (or improved) yield (as shown by gel band density).

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