Pierce™ Monomeric Avidin Agarose Kit, 2 mL

Thermo Scientific Pierce単量アビジンキットでは、ビオチン化分子の穏やかで非変性的なアフィニティー精製ができます。

単量アビジンキットの特長：

•便利なキット — プレパックカラムと緩衝液を備えた精製キット
• 非変性— 穏やかな溶出条件でビオチン化製品を精製します（2 mMフリービオチン）
• 再利用可能— 単量アビジンアガロースは、ビオチン結合能のわずかな損失（再生あたり約2.5%減少）で、少なくとも10回再生および再利用できます。
• 特異的— 抗体は、ビオチン結合特異性を維持し、ネイティブなアビジンの非特異的結合を低減します
• 柔軟性 — さまざまな生理学的緩衝液でサンプルを柔軟に結合し、0.1Mグリシンまたは2 mMビオチンとの競合により溶出します
• 優れた結合能— 1.2 mgを超えるビオチン化BSA/mLの樹脂

固定化された単量アビジンタンパク質は、高い特異性と中程度のアフィニティーでビオチンと結合し、非ビオチン分子を洗浄してから、結合したビオチン標識分子をリン酸塩緩衝生理食塩水（PBS）中の2 mMビオチンを使用して競合的に溶出させます。この手法は、ビオチン化タンパク質の精製においてもっとも穏やかな溶出条件を提供し、従来のアビジンおよびストレプトアビジン法に伴う汚染やその他の問題を回避します。その後、0.1 Mグリシンを使用してカラムから残留している結合ビオチンを除去することで、他のビオチン化サンプルとの結合能を損なうことなく単量体アビジンカラムを再生できます。

一般的なアビジンまたはストレプトアビジンの場合、ビオチン結合アフィニティー（Kd = 10^-15 M）が非常に高いため、これらの従来の培地を用いた精製では、pH 1.5の8 Mグアニジン・HClや還元SDS-PAGEサンプルローディングバッファーでの煮沸などの溶出のための変性条件が必要です。このような過酷な溶出条件では一般的に、目的のビオチン化タンパク質に対する悪影響に加えて、無関係のタンパク質（すなわちアビジンやストレプトアビジンのサブユニット）がレジンから揮散したり、目的の精製産物と共溶出します。一方、アビジンをサブユニットモノマーとして樹脂（架橋アガロースビーズやUltraLink樹脂など）に結合すると、ビオチンに対する特異性は保持されますが、その後の溶出を助長するレベル（Kd = 10^-8M）までビオチン結合アフィニティが低下します。

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