Pierce™ Monomeric Avidin UltraLink™ Resin

Thermo Scientific Pierce単量体アビジンUltraLinkレジンは、ビオチン化タンパク質、ペプチド、および他の分子のアフィニティー精製に最適です。アビジン単量体を固定化することで、ネイティブの四量体アビジンよりもはるかに低いビオチン結合親和性を持つ浄化レジンが得られ、穏やかな溶出条件でビオチン化分子を回収できます。

固定化された単量体アビジンタンパク質は、高い特異性と中程度のアフィニティーでビオチンと結合し、非ビオチン分子を洗浄してから、結合したビオチン標識分子をリン酸緩衝生理食塩水（PBS）中の2 mMビオチンを使用して競合的に溶出できます。この手法は、ビオチン化タンパク質の精製においてもっとも穏やかな溶出条件を提供し、従来のアビジンおよびストレプトアビジン法に伴う汚染やその他の問題を回避します。その後、0.1 Mグリシンを使用してカラムから残留している結合ビオチンを除去することで、他のビオチン化サンプルとの結合能を損なうことなく単量体アビジンカラムを再生できます。

一般的なアビジンまたはストレプトアビジンの場合、ビオチン結合アフィニティー（Kd = 10^-15 M）が非常に高いため、これらの従来の培地を用いた精製では、pH 1.5の8 Mグアニジン・HClや還元SDS-PAGEサンプルローディングバッファーでの煮沸などの溶出のための変性条件が必要です。このような過酷な溶出条件では一般的に、目的のビオチン化タンパク質に対する悪影響に加えて、無関係のタンパク質（すなわちアビジンやストレプトアビジンのサブユニット）がレジンから揮散したり、目的の精製産物と共溶出します。一方、アビジンをサブユニット単量体としてレジン（架橋アガロースビーズやUltraLinkレジンなど）に結合すると、ビオチンに対する特異性は保持されますが、その後の溶出に適したレベル（Kd = 10^-8M）までビオチン結合親和性が低下します。

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