培養細胞用Thermo Scientific細胞内タンパク質分画キットは、5つの異なる細胞コンパートメントからタンパク質を分離および濃縮できます。
培養細胞用細胞内タンパク質分画キットの特長:
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簡潔 — 機能的な細胞質、膜、核可溶性、クロマチン結合、細胞骨格のタンパク質画分を3時間以内に抽出できます
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便利 — グラジエントでの超遠心分離を使用しない簡単な手順を実行します
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完全 — 単一のキットで、細胞質、膜、可溶性核、クロマチン結合および細胞骨格タンパク質画分を取得できます
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培養細胞 — 培養哺乳類細胞で使用するために開発および最適化。組織サンプルには、
組織用細胞内分画キットを使用できます
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適応 — タンパク質アッセイ、ウェスタンブロッティング、タンパク質アッセイ、電気泳動移動度シフトアッセイ、レポーター遺伝子および酵素活性アッセイなどのダウンストリームアプリケーションに抽出物を使用します。
細胞内分画のアプリケーション:• 異なる細胞内コンパートメントからのタンパク質の抽出と濃縮
• 同じ細胞から細胞質、核、膜、細胞骨格のタンパク質を分離する
• 細胞質、核、膜、細胞骨格からのタンパク質の細胞のプロファイリング
• タンパク質転座の研究
細胞内タンパク質の分画は、タンパク質局在試験を可能にし、特異的細胞成分からタンパク質を単離します。Thermo Scientific細胞内タンパク質分画キットには、3時間以内で、細胞を機能性細胞質タンパク質、膜タンパク質、水溶性核タンパク質、クロマチン結合タンパク質、細胞骨格タンパク質のそれぞれに段階的に分画し、溶解するための試薬の組み合わせが含まれます。各細胞成分からの抽出物の分画間において、一般的に15%未満の汚染が確認されますが、これはタンパク質の局在および再分布の研究実験にとって十分な純度を保証しています。
培養細胞用Subcellular Protein Fractionation Kitには、4種類の抽出バッファー液、安定化ヌクレアーゼ、およびThermo Scientific停止プロテアーゼ阻害剤カクテルが含まれます。各キットには、それぞれ20µLで50個の細胞ペレットを分画するのに十分な試薬が含まれており、約2 gの細胞ペーストに相当します。(組織のサンプルについては、当社の
細胞内タンパク質分画キット(組織用)をご利用ください。)
細胞ペレットに添加する最初のキットの試薬は、細胞膜の透過性を高めて水溶性の細胞質タンパク質を抽出します。二番目の試薬は、血漿、ミトコンドリア、ERゴルジ体膜を抽出しますが、核膜は溶解させません。核を遠心により回収したあと、3番目の試薬により可溶性核抽出物が生じます。ミクロコッカスヌクレアーゼを使用して追加の核抽出を行うと、核タンパク質が放出されます。回収した不溶性ペレットは最後の試薬により抽出され、細胞骨格タンパク質が分離されます。
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