1-Step Human Coupled IVT Kit - DNA

Thermo Scientific 1-Step Human In Vitroタンパク質発現キットは、mRNAまたはプラスミドテンプレートから完全長のタンパク質の翻訳および転写後修飾を可能にし、1回の反応の収量は最大100 µg/mLです。

Human IVT Kitは、in vitro翻訳または転写／翻訳を組み合わた反応用の独自のHeLa細胞ライセートベースのタンパク質発現システムです。タンパク質発現は90分の1回の反応で完了し、これを、最適化されたpT7CFE1発現ベクターと組み合わせることで6時間まで延長してタンパク質生成を100 µg/mLまで継続できます。Human IVT Kitトは、タンパク質相互作用の研究、迅速な変異解析、および活性測定にすぐに使用できる機能性酵素、リン酸化タンパク質、糖タンパク質、および膜タンパク質を発現させることができます。

1-Step Human Coupled IVT Kitの特長：

•機能的—ヒトの翻訳機構を使用して活性タンパク質を発現す
• 便利—転写と翻訳をワンステップで実行
• 高性能—ウサギ網状赤血球のin vitro翻訳より高収量
• 高い信頼性—ウサギ網状赤血球系では発現できないタンパク質を発現

従来法よりも優れている点：
•HeLa細胞フリー抽出物は翻訳後修飾を有するタンパク質を発現できます
•正確な翻訳により、ダウンストリームアプリケーションに対応できる完全長のタンパク質を得られます
•タンパク質翻訳は、EMCV IRESエレメントや他のmRNA安定化エレメントで最適化されます

内容：
• キット一式には、HeLa細胞ライセート、アクセサリタンパク質、反応ミックス、ヌクレアーゼフリー水、発現ベクター、およびGFP陽性対照ベクターが含まれます

必要なもの：
• 30℃のインキュベーターまたはウォーターバス

アプリケーション：
• 酵素活性を測定するためにタンパク質を発現させる
• 変異解析
• ゲルシフトアッセイに使用するタンパク質を発現させる
• 共免疫沈降
• 細胞毒性タンパク質を発現させる
• 非天然アミノ酸の標識

DNA用1-Step Coupled Human IVT Kitは、改変HeLa細胞株から細胞転写および翻訳機構を使用した細胞フリーシステムです。この手順は迅速かつ容易で、他のタンパク質発現法に代わる効果的な方法です。適切な発現構成物をHeLa細胞溶解物、アクセサリタンパク質、反応ミックスの混合物に加え、30℃で90分～一晩インキュベーションするだけです。

RNA用1-Step Human IVT Kitも、ヒトタンパク質翻訳機構を利用して機能性タンパク質を生成します。このキットは、pT7CFE1発現ベクターで構築したEMCV IRESエレメントとmRNA安定化特性を有するmRNA転写物の翻訳に推奨されます。

ヒトin vitro翻訳システムは堅牢で、哺乳類、細菌、および原虫などのさまざまな生物種からタンパク質を発現できます。性能評価により、ルシフェラーゼなどの機能性タンパク質の発現レベルは、ウサギ網状赤血球系または大腸菌系のシステムと比較してヒトのシステムではるかに高いことが示されています。さらに、ヒトin vitro翻訳システムで発現させたタンパク質には、ダウンストリームアプリケーションを妨害する可能性のある物質による汚染はありません。

その他の製品データ
• mRNAテンプレートを使用したin vitroタンパク質発現用プロトコル
• Protein Biology Application Notes