Click-iT™ TUNEL Colorimetric IHC Detection Kit
Click-iT™ TUNEL Colorimetric IHC Detection Kit
Invitrogen™

Click-iT™ TUNEL Colorimetric IHC Detection Kit

Click-iT™ TUNEL比色IHC検出キットは、小規模で特異的な標識部分およびストレプトアビジン-ペルオキシダーゼ結合を使用して、組織および培養細胞サンプル中のアポトーシス細胞を同定するために使用されます。DNA断片化部位に標識部分を組み込むと、これらの部位にビオチン基を付加する「クリック」反応を触媒として検出することで、検出が可能となります。その後、ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼおよびペルオキシダーゼ基質を添加すると、光学顕微鏡で検出して将来の分析のために保存できる暗褐色のシグナルが得られます詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
C106251 Kit
製品番号(カタログ番号) C10625
価格(JPY)
139,500
Each
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数量:
1 Kit
Click-iT™ TUNEL比色IHC検出キットは、小規模で特異的な標識部分およびストレプトアビジン-ペルオキシダーゼ結合を使用して、組織および培養細胞サンプル中のアポトーシス細胞を同定するために使用されます。DNA断片化部位に標識部分を組み込むと、これらの部位にビオチン基を付加する「クリック」反応を触媒として検出することで、検出が可能となります。その後、ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼおよびペルオキシダーゼ基質を添加すると、光学顕微鏡で検出して将来の分析のために保存できる暗褐色のシグナルが得られます。

その他のイメージベースのアポトーシス細胞検出ツール >

•組織または細胞サンプル中のアポトーシス細胞の検出に最適化されています
•改良された比色TUNELアッセイ—反応性部位が小さいため、ラベルの組み込みが容易になります
•感度の向上—特異的なラベルの組み込みにより、バックグラウンドが低くなり、より明るい信号が得られます
•内容が充実した結果—細胞の形態、細胞環境、アポトーシスシグナルが明確に可視化されます
•柔軟性—アッセイは50の独立したTUNELアポトーシス検査用に校正できます

アポトーシス後期は、核形態の変化、クロマチン凝縮、核エンベロープ分解、DNA断片化によって特徴づけられます。末端デオキシヌクレオチジル転移酵素-dUTPニックエンドラベリング(TUNEL)アッセイは、断片化されたDNAの3’-OH末端に末端デオキシヌクレオチジル転移酵素(TdT)によって修飾されたdUTPが取り込まれることに基づいています。比色TUNELアッセイでは、ビオチン部位と共役したdUTPを利用し、その後、ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼ複合体とペルオキシダーゼ基質を添加することで、暗褐色のアポトーシスシグナルが得られます。しかし、比色TUNELアッセイはバックグラウンドが高くなりやすいため、シグナルの感度と特異性が低下します。

このような課題を解決するために開発されたClick-iT TUNEL比色IHC検出キットでは、アルキン基(小さな生体直交官能基)で修飾されたdUTPを利用することで、TdTによりヌクレオチドをより容易に取り込むことができるようになりました。取り込み後、特異性の高いクリック反応によりビオチンアジドとアルキン基が共有結合します。ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼ(西洋ワサビペルオキシダーゼ)にペルオキシダーゼ基質(DAB)を添加することで、アポトーシス細胞の比色検出が可能になります。クリック技術に固有の高い標識特異性により、バックグラウンドが低くなり、アポトーシス細胞の検出が向上します。

Click-iT TUNEL比色IHC検出キットは最適化されており、組織または細胞サンプルからのアポトーシス細胞の検出に必要なすべての試薬が含まれています。このキットに含まれる試薬は、50サンプルの検査に使用でき、一度に1~50サンプルの検査ができるように構成されています。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
使用対象 (装置)EVOS™ XL Core Imaging System, EVOS™ XL Imaging System
製品ラインClick-iT
製品タイプTUNEL Colorimetric IHC Detection Kit
数量1 Kit
出荷条件ドライアイス
検出法比色法
フォーマットスライド
Unit SizeEach
組成および保存条件
キットコンポーネントの保管条件:2~8℃および-5~-30℃

よくあるご質問(FAQ)

Can Metal Enhanced DAB Substrate Kit (Cat No. 34065) be used instead of the DAB provided in the Click-iT TUNEL Colorimetric IHC Detection Kit?

Yes, but we have not optimized its use with this kit.

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Can the Click-iT TUNEL Colorimetric IHC Detection Kit be used with other colorimetric dyes?

Yes, other colorimetric stains can be used.

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I ran out of the TdT enzyme used in the Click-iT TUNEL assay. Can I purchase it separately?

Yes, additional Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (rTdT) can be purchased as Cat. No. 10533-065 or 10533-075. Additional TdT reaction buffer can be purchased as Cat. No. 16314-015.

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Can I perform Click-iT EdU TUNEL detection on cells growing in 3D culture?

We have not validated the use of EdU TUNEL for apoptosis detection in 3D culture systems, but as this reagent is compatible for labeling cells in vivo, it is also expected to label cells in 3D culture systems. There are a number of reports in the literature that use this product in 3D culture systems; here are some citations:

Lei Y, Schaffer DV (2013) A fully defined and scalable 3D culture system for human pluripotent stem cell expansion and differentiation. Proc Natl Acad Sci U S A 110:E5039-E5048.
Derda R, Laromaine A, Mammoto A et al. (2009) Paper-supported 3D cell culture for tissue-based bioassays. Proc Natl Acad Sci U S A 106:18457-18462.
Robertson FM, Ogasawara MA, Ye Z et al. (2010) Imaging and Analysis of 3D Tumor Spheroids Enriched for a Cancer Stem Cell Phenotype. J Biomol Screen 15:820-829.

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For the Click-iT TUNEL for In Situ Apoptosis Detection Assay, how long should I digest my tissue samples in proteinase K?

Most tissue samples will be adequately digested in 15 minutes. The optimal incubation time will vary depending on tissue type and thickness. We have observed that brain tissue needs longer proteinase K treatment than other tissues tested.

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引用および参考文献 (13)

引用および参考文献
Abstract
Usp9X Regulates Cell Death in Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumors.
Authors:Bianchetti E, Bates SJ, Carroll SL, Siegelin MD, Roth KA,
Journal:Sci Rep
PubMed ID:30478285
'Malignant peripheral nerve sheath tumors (MPNSTs) are the leading cause of death in neurofibromatosis type 1 (NF1) patients. Current treatment modalities have been largely unsuccessful in improving MPNST patient survival, making the identification of new therapeutic targets urgent. In this study, we found that interference with Usp9X, a deubiquitinating enzyme ... More
Inhibition of Hedgehog signaling reprograms the dysfunctional immune microenvironment in breast cancer.
Authors:Hanna A, Metge BJ, Bailey SK, Chen D, Chandrashekar DS, Varambally S, Samant RS, Shevde LA,
Journal:Oncoimmunology
PubMed ID:30723576
'Host responses to tumor cells include tumor suppressing or promoting mechanisms. We sought to detail the effect of Hedgehog (Hh) pathway inhibition on the composition of the mammary tumor immune portfolio. We hypothesized that Hh signaling mediates a crosstalk between breast cancer cells and macrophages that dictates alternative polarization of ... More
The structural atrophy of the aneurysm wall in secondary expanding aortic aneurysms with endoleak type II.
Authors:Menges AL, Busch A, Reutersberg B, Trenner M, Kath P, Chernogubova E, Maegdefessel L, Eckstein HH, Zimmermann A
Journal:J Vasc Surg
PubMed ID:30792063
'Abdominal aortic aneurysm (AAA) has an age-dependent prevalence of 2% to 11% and is a leading cause of death in men aged >65 years if not treated surgically. Today, endovascular aneurysm repair (EVAR) is performed in up to 80% of elective cases and 60% of ruptured cases. Although EVAR improves perioperative, ... More
Anti-tumor effect of cisplatin in human oral squamous cell carcinoma was enhanced by andrographolide via upregulation of phospho-p53 in vitro and in vivo.
Authors:Chen S, Hu H, Miao S, Zheng J, Xie Z, Zhao H,
Journal:Tumour Biol
PubMed ID:28513299
'Oral squamous cell carcinoma is one of the most common neoplasm in the world. Despite the improvements in diagnosis and treatment, the outcome is still poor now. Thus, the development of novel therapeuticapproaches is needed. The aim of this study is to assess the synergistic anti-tumor effect of andrographolide with ... More
Synergistic anti-tumor efficacy of sorafenib and fluvastatin in hepatocellular carcinoma.
Authors:Cheng Y, Luo R, Zheng H, Wang B, Liu Y, Liu D, Chen J, Xu W, Li A, Zhu Y,
Journal:Oncotarget
PubMed ID:28423574
Drug resistance to sorafenib is common in patients with hepatocellular carcinoma(HCC). We examined the effects of a combination of sorafenib and fluvastatin on HCC using in vitro and in vivo models. The dual treatment induced apoptosis and reduced cellular viability in HCC more effectively than either drug alone. The combination ... More