CloneJET™ PCR Cloning Kit with DH10B Competent Cells

Thermo Scientific™

CloneJET™ PCR Cloning Kit with DH10B Competent Cells

Name: CloneJET™ PCR Cloning Kit with DH10B Competent Cells
SKU: K123120

このパッケージには、CloneJET PCRクローニングキット（20または40反応）とDH10Bコンピテントセルが含まれています。DH10Bコンピテントセルは、このキットでの使用を対象に最適化されており、ライゲーション産物で直接、形質転換させることができます。CloneJET詳細を見る

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製品番号（カタログ番号）	数量
K123120	20反応
K123240	40反応

2 オプション

製品番号（カタログ番号） K123120

価格（JPY）

25,600

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Ends: 27-Mar-2026

42,800

割引額 17,200 (40%)

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数量:

20反応

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このパッケージには、CloneJET PCRクローニングキット（20または40反応）とDH10Bコンピテントセルが含まれています。DH10Bコンピテントセルは、このキットでの使用を対象に最適化されており、ライゲーション産物で直接、形質転換させることができます。

CloneJET PCRクローニングキット
Thermo Scientific CloneJET PCRクローニングキットは、任意の熱安定性DNAポリメラーゼで生成されたPCR産物を極めて効率的にクローニングできる、高度なポジティブセレクションシステムです。あらゆる平滑末端または付着末端DNA断片のクローニングが可能です。このキットは、リン酸化DNA断片と非リン酸化DNA断片の両方で優れた効果を発揮します。同梱のポジティブセレクションベクターへのライゲーションに要する時間はわずか5分で、99％以上の組換えクローンを産生します。プルーフリーディング酵素で生成された平滑端末PCR産物は、クローニングベクターに直接ライゲーションされます。

ノンプルーフリーディングDNAポリメラーゼまたはDNAポリメラーゼの混合物を使用して生成されたPCR産物は、5分間のライゲーション反応を行う前に、キットに付属の耐熱性DNA平滑化酵素を用いて平滑化する必要があります。DH10Bコンピテントセルは、CloneJET PCRクローニングキットでの使用を対象に最適化されており、ライゲーション産物で直接、形質転換させることができます。

CloneJET PCRクローニングキットには、すぐに使える革新的なポジティブセレクションクローニングベクターpJET1.2/bluntが同梱されています。ベクターは致死性の制限酵素遺伝子を含んでいます。クローニング部位へのインサートDNAのライゲーションにより、その制限酵素遺伝子は機能を喪失します。結果として、組換えプラスミドを持つ細菌性細胞のみにコロニー形成させることが可能になります。インサートを持たない再環化pJET1.2/bluntベクターは、形質転換後、宿主大腸菌細胞を死滅させる致死制限酵素を発現します。このポジティブセレクションは、コロニースクリーニングのプロセスを大幅に加速し、青／白の選択に必要な追加コストを削減します。

•高速—わずか5分間のPCRクローニング
• 高性能—>99%のポジティブクローン
• クローニングバックグラウンドなし—ポジティブセレクションベクター
• 多用途—平滑末端または付着末端クローニングに最適
• 経済的—費用のかかる青白スクリーニングは不要

アプリケーションの例：
•10 kbまでの平滑末端または3'末端にdAを付加したPCR産物のクローニング
• 制限酵素で作成したDNA断片のクローニング
• クローン化DNAシーケンシング
• T7プロモーターからのクローン化インサートのin vitroおよびin vivo転写

CloneJET PCRクローニングキットの詳細›

DH10Bコンピテントセル
Thermo Scientific DH10Bコンピテントセルは、高効率で化学的な大腸菌コンピテントセルです。DH10B株は、メチルシトシンとメチルアデニンを含むDNAのクローニングに適しており、原核生物と真核生物のゲノムDNAの両方を効率的にクローニングできます。これらの細胞は、プラスミド由来ベクターを使用したcDNAライブラリの構築に最適です。ジェノタイプ：F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG

•高い形質転換効率：>1x109 cfu/μg pUC19 DNA
• ルーチンのハイスループットクローニングアプリケーションに最適
• バイアルパッケージごとに2反応に対応できる利便性
• S.O.C.増殖培地を同梱

関連製品
CloneJET PCRクローニングキット（コンピテントセルなし）
aLICator LICクローニングおよび再現システム

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

仕様

抗生物質耐性菌アンピシリン（AmpR）

菌株または酵母株DH10B

細胞タイプDH10B

クローニング法平滑PCR、制限酵素／MCS

効率≧1 x 10^9

使用対象（アプリケーション）PCRクローニング

反応数20反応

製品ラインThermo Scientific

製品タイプPCRクローニングキット

数量20反応

サンプルタイプPCR産物

出荷条件ドライアイス

ベクターpJET1.2／平滑

フォーマットキット

Unit SizeEach

組成および保存条件

• サブクローニング用10 x DH10Bコンピテントセル（100 μL）
• pUC19 DNA（20 μL）（100 pg/μL）
• S.O.C.培地（5 mL）
• pJET1.2／平滑クローニングベクター（24 μL）（50 ng/L）
• 2X反応バッファー（300 μL）
• T4 DNAリガーゼ（24 μL）（5 U/μL）
• DNA平滑化酵素（24 μL）
• DNA平滑化酵素（24 μL）
• pJET1.2フォワードシーケンシングプライマー、10 μM水溶液（50 μL）
• pJET1.2逆シーケンシングプライマー、10 μM水溶液（50 μL）
• コントロールPCR産物、976 bp 3’-dAオーバーハング（8 μL）（24 ng/μL）
• ヌクレアーゼ不含の水、（1.25 mL）

よくあるご質問（FAQ）

Can I use the vector pJET1.2 for protein expression?

The pJET1.2 vector is not specifically designed for protein expression. It contains the T7 RNA promoter for in vitro transcription of the cloned insert. In some cases, this T7 promoter can be used for non-toxic gene expression in bacterial strains having IPTG inducible T7 RNA polymerase (like E. coli BL21); however, the promoter does not contain regulatory elements and protein expression will not be well regulated.

What are expected results of colony PCR when screening clones from the CloneJET kit?

Using pJET1.2 Forward and Reverse Sequencing Primers in PCR (as described in the protocol), negative colonies would yield PCR products that are about 120 bp long. Positive colonies would yield longer PCR products that should reflect the insert size (with addition of 120 bp from the vector).

Where can I expect the insert in the pJET1.2/blunt cloning vector after successful cloning?

The insert can be expected at the Eco32I (EcoRV) site in the vector at the position 369 since the pJET1.2/blunt cloning vector was linearized with Eco32I.

What type of DNA fragments can be cloned into the pJET1.2/blunt vector?

Any DNA fragment (either blunt- or sticky-end) that is 6 bp to 10 kb long and generated from PCR or restriction digestion, can be successfully cloned using the kit.

Do I need phosphorylated PCR Primers for CloneJET PCR Cloning Kit?

Phosphorylation of the PCR primers is not required since the 5'-ends of the pJET1.2/blunt vector contain phosphoryl groups for ligation.

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