CellSensor™ irf1-bla CTLL-2 Cell Line

JAK/Statシグナル伝達経路は、異なるサイトカインに対する細胞応答において重要な役割を果たします。JAK/Stat経路のひとつであるJak2/Stat5は、インターロイキン - 3（IL- 3）、プロラクチン、エリスロポエチン（EPO）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM - CSF）に反応して細胞増殖を媒介します。JAK2遺伝子ノックアウトは、赤血球形成の異常による胚性致死を引き起こし、Jak2/Stat5経路が赤血球形成において重要な役割を果たすことが示唆されています。骨髄増殖性疾患（MPD）患者の高い割合に存在するJAK2（V617F）における活性化変異が最近発見されたことにより、Jak2/Stat5経路が特定の形態のMPDに対する潜在的な治療ターゲットである可能性が示唆されています。活性化されたStat5転写因子は、カゼイン、インターフェロン調節因子 - 1（IRF - 1）、およびその他の多くの遺伝子のプロモーター領域βに見られる特異的なパリンドロームDNA配列を認識し、結合します。CellSensor® irf1 - bla CTLL2細胞株には、IRF - 1応答配列のコントロール下でβ - ラクタマーゼレポーター遺伝子が含まれており、CTLL2細胞に安定的に統合されています。CTLL2細胞は、C57BL/6マウス由来の細胞傷害性T細胞のクローンであり、マウスインターロイキン - 2（mIL - 2）依存性細胞増殖をします。この細胞株は、MIL - 2 を使用して最適化された条件下でEC50およびZ’値について検証されています。この細胞株は、DMSO濃度、細胞数、刺激時間、基質のローディング時間など、さまざまなアッセイ条件でも試験されています。経路阻害物質に対する反応性も試験しました。CellSensor® irf1 - bla CTLL 2細胞を、384ウェルフォーマットを用いて、表示濃度範囲でMIL - 2により3回刺激しました。細胞を0.5%アゴニストとともに5時間インキュベートした後、2.5時間LiveBLAzer™ - FRET B/G Substrate（CCF4 - AM）と結合しました。標準蛍光プレートリーダーを使用して、460 nmおよび530 nmの蛍光発光値を取得しました。表示濃度のMIL - 2に対して各複製の460/530比がプロットされました。CellSensor® irf1 - bla CTLL 2細胞を、表示濃度範囲で384ウェルフォーマットのJAK阻害剤1で30分間処理しました。その後、0.5％ DMSOでmIL - 2アゴニスト（1 ng/ml）を用いて細胞を5時間インキュベートし、続いてLiveBLAzer™ - FRET B/G基質（CCF4-AM）と2時間結合しました。標準的な蛍光プレートリーダーを使用して460 nmおよび530 nmで蛍光発光値を取得し、一連のコントロール（非刺激細胞およびEC80刺激細胞）に対する阻害をパーセントに変換し、JAK 1阻害剤の表示濃度に対してプロットしました。学術・非営利のお客様は、特別価格でのご提供となりますので、お問い合わせください。