Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli cells

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent <i>E. coli</i> cells

Citations & References (13)

Invitrogen™

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli cells

Name: Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, with One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli cells
SKU: K280020

Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するための、高効率な5分間ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します。各キットには、ポジティブセレクション用のccdB遺伝子を含むZero詳細を見る

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製品番号（カタログ番号）	数量
K280020	25反応
K280040	50反応
K2800J10 または、製品番号K2800-J10	10反応

3 オプション

製品番号（カタログ番号） K280020

価格（JPY）

131,400

Each

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数量:

25反応

Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するための、高効率な5分間ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します。各キットには、ポジティブセレクション用のccdB遺伝子を含むZero Blunt™ TOPO™ ベクター（図を参照）が含まれており、組換え体によるプラスミドベクターの増殖のみが可能です。Zero™ Blunt™ TOPO™キットは、お客様のニーズと予算に応じて、さまざまなコンピテントセルを使用したものを、またはコンピテントセルなしでご利用いただけます。Zero™ Blunt™ TOPO™ PCR クローニングキットの特長：

迅速かつ簡単—PCRからクローンまでわずか3ステップ、わずか5分のハンズオンタイムで行えます
効率的—正しいインサートを使用して、最大95％のクローンを生成できます
実績—4,000件を超える引用が裏づけるとおり、10年以上にわたり信頼性の高いパフォーマンスを発揮しています
シンプル—リガーゼ、PCR後の処理、特定の配列を含むPCRプライマーは不要です

Zero Blunt™ TOPO™ クローニングキット—概要

ベクター：pCR™Blunt II-TOPO™ ベクター—ccdB遺伝子が含まれており、組換え体の直接選択が可能です

クローニング法：TOPO™クローニング—トポイソメラーゼIベースの、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物の5分間ライゲーション

コンピテントセル：各種オプション—一般的で高効率なバクテリオファージT1-耐性の、急速に増殖するコンピテントセルを備えたキットから選択するか、ユーザー独自のキットを使用できます。

pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクター—プルーフリーディングポリメラーゼ用
pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクターは、Platinum™ PfxDNAポリメラーゼなどの耐熱性プルーフリーディングポリメラーゼによって生成された平滑末端PCR産物をクローニングします。pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクターには以下が含まれます。

•挿入配列を簡単に切り出すための、PCR生成物挿入部位に隣接したEcoRI部位
•大腸菌での選別用にカナマイシンおよびZeocin™耐性遺伝子の選択が可能
•in vitro RNA転写とシーケンシング用のSP6プロモーター／プライマー領域
•シーケンシングまたはPCRスクリーニング用のM13フォワードおよびリバースプライマー領域

pCR™Blunt II-TOPO™クローンの選択
pCR™-Blunt II-TOPO™ は、致死的な大腸菌遺伝子ccdBの破壊を介して、組換え体を直接選択できます。ベクターには、LacZαフラグメントのC-末端に融合したccdB遺伝子が含まれています。平滑末端PCR産物のライゲーションは、LacZα-ccdB遺伝子融合の発現を阻害し、形質転換時に陽性組み換え体のみを増殖させます。非組換えベクターを含む細胞はプレーティング時に死滅します。そのため、青／白スクリーニングは不要です。

TOPO™ ベースの簡単なクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の処理、ベクター調製、その他の時間のかかるDNA操作手順は必要ありません。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして大腸菌コンピテントセルを形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大95%まで使用することで、スクリーニングするクローンの数を減らし、時間とコストを節約できます。このキットで使用されるpCR™ Blunt II-TOPO™ベクターには致死的なccdB遺伝子が含まれており、耐熱性プルーフリーディングポリメラーゼによって生成される平滑末端PCR組換え体製品を効率的に選択できます。

クローニングの標準製品
TOPO™クローニング技術は、10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼できるパートナーとなっています。高速で使いやすく、効率的なTOPO™クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™ Kitのオプション
Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kitは、平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するためのキットであり、さまざまなコンピテントセルとともに購入できます。これらのコンピテントセルは、お客様のニーズに応じてさまざまな利点を提供します：

一般的なクローニング：TOP10細胞（カタログ番号：K2800-20、K2800-40）
高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™細胞（カタログ番号：K2860-01、K2860-40）
一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号 K2820-20、K2820-40）
迅速な増殖：Mach1™-T1Rの化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号：K2830-20）
自作のコンピテントセルを使用：柔軟性を高めながらコスト削減が可能（カタログ番号450254）

当社は、当社は、クリーンでシーケンス対応の組み換えプラスミドの分離に使用するためのPureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit（カタログ（前の文節に統合）

研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。

仕様

菌株または酵母株TOP10

細胞タイプケミカルコンピテント

クローニング法Blunt TOPO™

製品ラインOne Shot

製品タイプPCRクローニングキット

プロモーターSP6

数量25反応

ベクターBlunt DNA クローニングベクター

フォーマットキット

Unit SizeEach

組成および保存条件

ボックス1：
• 線形化およびトポイソメラーゼ I-活性化pCR™Blunt II-topo™ベクター
•。塩溶液
• dNTPs
•。コントロールテンプレート
•M13フォワードおよびリバースプライマー
•滅菌水。

-5～-30℃で保存します。
すべての試薬は、適切に保存すると6ヶ月間安定しています。

ボックス2：
•One Shot™ケミカルコンピテントまたはElectrocomp™大腸菌
•S.O.C.培地
•、スーパーコイルpUC19コントロールプラスミド

は、-68～-85℃で保存します。

よくあるご質問（FAQ）

What is the difference between the pCR2.1-TOPO and pCR4-TOPO vectors?

The vector backbones for both of these vectors are very similar. The main difference is that the pCR4-TOPO vector has sequencing primer sites located as close as 33 base pairs from the PCR product insertion site. This minimizes the amount of vector DNA sequence that needs to be read before reaching the sequence of the insert, making the pCR4-TOPO vector very useful for sequencing applications.

What is the difference between the pCR2.1-TOPO and pCRII-TOPO vectors?

The vector backbones for both of these vectors are very similar. The main difference is that the pCRII-TOPO vector is a dual promoter vector, containing the SP6 and T7 promoters for in vitro transcription/sequencing, whereas the pCR2.1-TOPO vector contains only the T7 promoter for in vitro transcription/sequencing. Both vectors contain the M13 Forward and Reverse primer sites for sequencing or PCR screening.

Your TOPO cloning kits contain a control template and control primers. Can I obtain the sequence of the control template?

The sequence of the control template is proprietary.

What is the best molar ratio of PCR product:vector to use for TOPO TA cloning? Is there an equation to calculate the quantity to use?

We suggest starting with a molar ratio of 1:1 (insert:vector), with a range of 0.5:1 to 2:1. The quantity used in a TOPO cloning reaction is typically 5-10 ng of a 2 kb PCR product.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 (insert:vector ratio)

What is the best ratio of insert:vector to use for cloning? Is there an equation to calculate this?

The optimal ratio is 1:1 insert to vector. Optimization can be done using a ratio of 0.5-2 molecules of insert for every molecule of the vector.

Equation:

length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio

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引用および参考文献 (13)

引用および参考文献

Abstract

Contribution of acquired carbapenem-hydrolyzing oxacillinases to carbapenem resistance in Acinetobacter baumannii.

Authors:Héritier C, Poirel L, Lambert T, Nordmann P

Journal:Antimicrob Agents Chemother

PubMed ID:16048925

'Carbapenem-hydrolyzing oxacillinases are reported increasingly in Acinetobacter baumannii. Since they hydrolyze carbapenems at low levels, the roles of carbapenem-hydrolyzing oxacillinases OXA-23, OXA-40, and OXA-58 in A. baumannii were determined. The bla(OXA-23), bla(OXA-40), and bla(OXA-58) genes were inserted in broad-host-range plasmid pAT801 and transformed in Escherichia coli DH10B and in A. ... More

The origin recognition complex marks a replication origin in the human TOP1 gene promoter.

Authors: Keller Christian; Ladenburger Eva-Maria; Kremer Marcel; Knippers Rolf;

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:12004060

'The locations of the origin recognition complex (ORC) in mammalian genomes have been elusive. We have therefore analyzed the DNA sequences associated with human ORC via in vivo cross-linking and chromatin immunoprecipitation. Antibodies specific for hOrc2 protein precipitate chromatin fragments that also contain other ORC proteins, suggesting that the proteins ... More

De novo ceramide regulates the alternative splicing of caspase 9 and Bcl-x in A549 lung adenocarcinoma cells. Dependence on protein phosphatase-1.

Authors: Chalfant Charles E; Rathman Kristin; Pinkerman Ryan L; Wood Rachel E; Obeid Lina M; Ogretmen Besim; Hannun Yusuf A;

Journal:J Biol Chem

PubMed ID:11801602

'In a recent study, we showed that ceramide induces the dephosphorylation of SR proteins, a family of protein factors that regulate alternative splicing. In this study, the regulation of the alternative processing of pre-mRNA of both caspase 9 and Bcl-x(L) was examined in response to ceramide. Treatment of A549 lung ... More

A gene network for long-day flowering activates RFT1 encoding a mobile flowering signal in rice.

Authors:Komiya R, Yokoi S, Shimamoto K

Journal:Development

PubMed ID:19762423

'Although some genes that encode sensory or regulatory elements for photoperiodic flowering are conserved between the long-day (LD) plant Arabidopsis thaliana and the short-day (SD) plant rice, the gene networks that control rice flowering, and particularly flowering under LD conditions, are not well understood. We show here that RICE FLOWERING ... More

Estrogen receptor-mediated regulation of microRNA inhibits proliferation of vascular smooth muscle cells.

Authors:Zhao J, Imbrie GA, Baur WE, Iyer LK, Aronovitz MJ, Kershaw TB, Haselmann GM, Lu Q, Karas RH

Journal:Arterioscler Thromb Vasc Biol

PubMed ID:23175673

Estradiol (E2) regulates gene transcription by activating estrogen receptor-a and estrogen receptor-ß. Many of the genes regulated by E2 via estrogen receptors are repressed, yet the molecular mechanisms that mediate E2-induced gene repression are currently unknown. We hypothesized that E2, acting through estrogen receptors, regulates expression of microRNAs (miRs) leading ... More

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