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Vektor-basierte RNAi
RNA-Interferenz (RNAi) ist die geeignetste Methode für einen effizienten Gen-Knockdown, um Proteinfunktionen in einer Vielzahl unterschiedlicher Zellen untersuchen zu können. Die Verwendung von Vektoren in RNAi-Experimenten erweitert die Möglichkeiten für Experimente über Small/Short interfering RNAs (siRNAs) hinaus.
Anwendungsmöglichkeiten der Vektortechnologien:
- Transiente oder stabile Ziel-Knockdowns
- Durchführung von RNAi in jedem Zelltyp, selbst in schwer zu transfizierenden, in primären und nicht teilenden Zellen
- Steuerung der Geninhibition über induzierbare RNAi-Expression
- Die Wahl für eine reine Zellpopulation mit stabiler Expression einer RNAi-Sequenz
- Steuerung der Genexpression in vivo mit gewebespezifischen Promotern
Tabelle 1 Vergleich der RNAi-Vektortechnologien.
| BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi | BLOCK-iT™ shRNA |
|---|---|
| Pol II Expressionssystem | Pol III Expressionssystem |
| Polycistronische Expression von miRNAs (Verkettung) | Expression einer einzigen shRNA pro Promoter |
| Koexpression von GFP ermöglicht die Nachverfolgung der Expression | Nur die Zuführung kann nachverfolgt werden (mit separater Expressionskassette) |
| Kompatibel mit den meisten Gateway® DEST Vektoren | Kompatibel mit BLOCK-iT™ DEST Vektoren |
| Bester Designerfolg (> 70 %) | Moderater Designerfolg (~ 50 %) |
Tabelle 2 Unsere RNAi-Vektor-Produkte.
| Produkttyp | Beschreibung | Online-Bestellung |
|---|---|---|
| BLOCK-iT™ miR RNAi Select | Vorkonzipierte miR RNAi-Vektor-Inserts für alle Organismen | Vektor-Inserts: BLOCK-iT™ RNAi Express Vektorbackbones: Online-Katalog |
| BLOCK-iT™ Pol II miR Validated miRNA Vector DuoPak | Validierte miR RNAi-Konstrukte für humane Kinase-Gene | Glycerol-Stammlösung: BLOCK-iT™ RNAi Express |
| Individuelle BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi-Vektoren | Individuelle miR RNAi-Vektoren für alle Organismen | Vektor-Inserts: BLOCK-iT™ RNAi Designer Vektorbackbones: Online-Katalog |
| BLOCK-iT™ shRNA-Vektoren | Individuelle shRNA-Vektoren für alle Organismen | Vektor-Inserts: BLOCK-iT™ RNAi Designer Vektorbackbones: Online-Katalog |
| Kontrollen für RNAi-Vektoren | Transfektion, Positiv- und Negativ-Kontrollen für alle RNAi-Experimente | Online-Katalog |
Ambion® pSilencer™ siRNA Expressionsvektoren
Die Produktreihe der pSilencer siRNA Expressionsvektoren umfasst mehrere klassische Plasmid-Vektoren mit U6-Promotern (RNA-Polymerase III). Diese Systeme umfassen den vorgeschnittenen Vektor, einen Negativkontroll-Vektor und ein Positivkontroll-Insert. Diese Vektoren umfassen keine Zellen und sind nicht Gateway-kompatibel.
| Expressionsvektor | Vektortyp | Applikation |
|---|---|---|
| pSilencer 2.1-U6 Neo | shRNA-Vektor (nicht Gateway kompatibel) | Transiente oder stabile Expression von shRNA in transfizierten Zellen. Die Wahl für eine stabile Expression mit Neomycin. |
| pSilencer 2.1-U6 Hygro | shRNA-Vektor (nicht Gateway kompatibel) | Transiente oder stabile Expression von shRNA in transfizierten Zellen. Die Wahl für eine stabile Expression mit Hygromycin. |
| pSilencer 2.1-U6 Puro | shRNA-Vektor (nicht Gateway kompatibel) | Transiente oder stabile Expression von shRNA in transfizierten Zellen. Die Wahl für eine stabile Expression mit Puromycin. |
Ressourcen
Verschiedene Möglichkeiten für Design und Bestellung von siRNA
Literatur
Web-Seminare und Anleitungen
Kundenspezifischer Service
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Fragen
Senden Sie Ihre Fragen an unsere führenden Wissenschaftler unter RNAiresearcher@thermofisher.com.
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