Pierce™ Direct Magnetic IP/Co-IP Kit

サーモフィッシャーPierce Direct Magnetic IP/Co-IP Kitは、NHSケミストリを使用してIP抗体を磁気ビーズに共有固定化し、効果的な免疫沈降と共免疫沈降を実現します。

Magnetic IP with NHSケミストリは利便性が高く、プロテインAおよびプロテインGで見られるカップリング効率のばらつきなしに、あらゆる種やサブタイプのIP抗体を固定化できます。IP抗体は共有結合的に結合しているため、標的タンパク質やco-IPタンパク質複合体を抗体汚染なしに溶出、分析できます。このキットには、最適化されたプロトコルと、抗体のカップリングに必要なすべてのバッファーと試薬が含まれており、手動の磁気スタンドやサーモフィッシャーのKingFisher Instrumentsのような自動化されたプラットフォームを使用して、高収率のIPまたはco-IPを実現します。

Direct Magnetic IP/Co-IP Kitの特長：

•Antibody-free IP—抗体は磁気ビーズに不可逆的に付着しているため、無傷の抗体、または精製抗原との重鎖と軽鎖の共溶出は無視できる程度
• 高速—4時間以内に完全な抗体結合と免疫沈降が可能
• 便利—IP/co-IPキットには、最適な免疫沈降を行うために必要な磁気ビーズとすべての必須バッファーが同梱
• 抗体互換性—任意の抗体種、クラス、アイソタイプと併用可能
• 低非特異的結合—ビーズ表面は事前にブロック化されており、すべての非反応NHS-エステル基は完全にクエンチされる
• プロトコル適合—ビーズへのタンパク質のカップリングおよび免疫沈降は、手動または自動化によって可能（例、サーモフィッシャーKingFisher Instruments）
• 拡張性—1回のIP実験に必要な量の抗体のみを使用するか、または複数の実験のためにより多くの量の抗体磁気ビーズを用意することが可能

Pierce Direct IP/Co-IP Kitのプロトコルは、NHS-エステル構造を介してPierce NHS-Activated Magnetic Beadsに対するIP抗体を結合その後、抗体結合ビーズをクエンチバッファーでインキュベートし、残りの活性NHSサイトをブロックします。調製した抗体結合ビーズは、目的のタンパク質抗原を含む細胞溶解質または組織抽出物とインキュベートされるため、抗原：抗体複合体を形成できます。ビーズを洗浄して非結合物質を除去し、低pHの溶出バッファーを使用して結合抗原を抗体結合ビーズから解離させます。中和バッファーが含まれているため、分離された抗原の沈殿を防ぎ、下流アプリケーションでのタンパク質活性を確保できます。レーンマーカーサンプルバッファーは、SDS-PAGE分析用のサンプルを調製するために含まれています。このプロトコルは、アッセイごとに 2～10 μgのIP抗体用に最適化されています。最適なco-IP収量を得るには、10 μgの抗体を使用してください。ビーズは、磁気スタンドを使用して手動で処理することも、サーモフィッシャーKingFisher Flexなどの装置を使用して自動化することもできます。

プロテインA/G磁気ビーズを用いた従来のIPは、抗体とプロテインA/Gとの受動的な非共有結合を伴うため、通常の架橋やNHSエステルケミストリを介した磁気ビーズへの抗体の共有結合を伴うIPプロトコルよりも高い抗原収量を実現します。共有結合により、一部の機能的抗体結合部位が失われることは避けられません。NHSケミストリでこの限界を克服するためには、直接IP法でのIP抗体使用量を従来のIP法よりも多くする必要があるかもしれません。IP抗体と磁気ビーズと共有結合した免疫沈降の利点は、干渉する抗体バンドがないウェスタンブロットとゲルです。

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