EZ-Link™ Amine-PEG4-Desthiobiotin, No-Weigh™ Format

Thermo Scientific EZ-Linkアミン-PEG4-デスチオビオチンは、ビオチン様基をストレプトアビジンから溶出することができるPEG化アミン化合物で、標識および精製のためのカルボジイミド（EDC）のカルボン酸への結合に最適です。

EZ-Link アミン-PEG4-デスチオビオチン, No-Weighフォーマットの特長：

•デスチオビオチン—ビオチンのアナログにより、ストレプトアビジンから簡単に溶出できるため、アフィニティー精製アプリケーションに最適です
• アミン活性化—第一級アミンを、EDCやその他の架橋剤を使用してタンパク質および物質表面へ架橋できます
• PEG化—スペーサーアームのポリエチレングリコール（PEG）基によってビオチン化分子の水溶性が向上します

このデスチオビオチン化合物は、4ユニット ポリエチレングリコール（PEG） スペーサーアームを含むアミン修飾化合物です。デスチオビオチン化は、カルボジイミド架橋剤 EDC （製品番号22980）を使用して、表面物質、ペプチド、またはタンパク質上のカルボキシル基に第一級アミンを結合させることで実現します。EDCは、カルボキシル基を活性化してアミノ-ビオチンの –NH2基に結合させ、アミド結合を形成します。このデスチオビオチンタグは、ストレプトアビジンやその他のビオチン結合タンパク質に高い特異性を持って結合するものの、穏やかな条件（すなわち、通常の遊離ビオチンとの競合的な置換）で容易に溶出します。そのため、この試薬は、標識タンパク質の非変性溶出が必要なアビジン-ビオチン技術における アミン-PEG3-ビオチン （製品番号21347）の代替として有用です。No-Weighフォーマット（5×1 mgの再密封可能バイアル）は、少量の試薬を計量する際の困難を解消し、未使用の試薬の分解を最大限保防ぎます。

デスチオビオチンとビオチン
デスチオビオチン は、単環で硫黄フリーなビオチンのアナログであり、ストレプトアビジンとの結合特異性はほぼ同等ですが、ビオチンより親和性は低くなります（それぞれ1/Kd =10^11と10^15M）[1-2] 。その結果、デスチオビオチン化ベイトタンパク質とその相互作用パートナーは、遊離ビオチンとの競合的な置換に基づいて、穏やかな条件でストレプトアビジンアフィニティー樹脂から簡単かつ特異的に溶出できます。また、生体サンプルを用いたプルダウンアッセイ実験では、デスチオビオチンのこうした穏やかな遊離特性により、遊離ビオチンを用いて標的タンパク質複合体を溶出した際に、ストレプトアビジンへの結合を維持した状態で、内因性ビオチン化分子の共精製を最小限に抑えることができます。また、修飾済みアビジン-ビオチンアフィニティーシステムにより、複合体の結合を解除したり、標的タンパク質や細胞を損傷したりする可能性のある厳しい溶出条件を用いる必要がなくなります。デスチオビオチンベースの手法は、融合タグで発現しない天然タンパク質や組換えタンパク質を使用する場合や、インタクトな細胞や細胞表面タンパク質を標的とするようなネイティブ条件下で補足されたタンパク質を分離する場合に最適です。

アミン化合物による標識
アミン化合物は、さまざまな方法でタンパク質や他の分子の官能基に結合できます。もっとも一般的な方法は、次を使用して、末端の第一級アミンをカルボキシル基に架橋することです。カルボキシル基（-COOH）は、アスパラギン酸残基またはグルタミン酸残基、およびポリペプチドのカルボン末端に発生します。EDC（製品番号22980）で活性化すると、カルボン酸塩はアミノ基（–NH2）と反応してアミド結合を形成します。カルボキシル基分子および表面物質は、EDCとスルホ-NHS（製品番号24510）を併用して事前に活性化し、第一級アミンに対する反応を起こすことができます（NHS Ester化学を参照）。