FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase (1 U/μL)

Thermo Scientific FastAP感熱性アルカリホスファターゼの触媒作用により、DNA、RNA、およびヌクレオチドから5'-および3'-リン酸塩基を放出します。この酵素は、タンパク質からリン酸塩基も除去します。

FastAPは新しいアルカリホスファターゼで、すべてのThermo Scientific制限酵素バッファーのほか、PCRバッファー中で活性化します。37℃の条件で、すべてのタイプのDNA末端（平滑、5'-および3'-オーバーハング）を10分で脱リン酸化します。酵素は、75℃の条件で5分間で不活性化されます（「サポートデータ」の図1を参照）。そのため、ライゲーションの前にアルカリホスファターゼを除去する必要はありません。

特長

• 組換え酵素
• 迅速な脱リン酸化 — 37℃で10分間
• 迅速かつ完全な不活性化 — 75℃で5分間
• ベクターDNAの同時消化および脱リン酸化
• 制限酵素およびPCRバッファーで100%の活性化
• Exo Iと組み合わせたPCRクリーンアップ
• タンパク質の脱リン酸化

すべてのタイプのDNA末端に1つのプロトコルで対応：
• 5'-オーバーハング
• 3'-オーバーハング
• 平滑末端
• 単一ヌクレオチド

アプリケーション

• ライゲーション中の再循環を防ぐためのクローニングベクターDNAの脱リン酸化
• ベクターDNAの同時消化および脱リン酸化
• PCR産物のクリーンアップ：PCR産物のシーケンシング前のヌクレオチドの分解
• T4ポリヌクレオチドキナーゼで標識する前の核酸5'末端の脱リン酸化
• DNAおよびRNA基質の脱リン酸化が必要なその他のアプリケーション
• タンパク質の脱リン酸化

注記

• FastAP感熱性アルカリホスファターゼをDNAに結合すると、アガロースゲルのバンドシフトが生じる場合があります。これを避けるには、6倍DNAローディング色素とSDS溶液を使って、サンプルを65℃で10分間インキュベートし、電気泳動の前に氷で冷やします。
• FastAP熱感性アルカリホスファターゼは、すべての制限酵素バッファー中で活性化し、消化対象のDNAに直接添加できます。脱リン酸化反応の前に制限酵素を熱不活化する必要はありません。