Exosomes | Thermo Fisher Scientific

Produits associés à la recherche sur les exosomes

Les exosomes sont de petites vésicules (30 à 150 nm) contenant des charges de protéines et d’ARN complexes. On considère désormais que les exosomes sont des vésicules spécifiquement sécrétées qui permettent la communication intercellulaire et qui présentent un intérêt croissant, non seulement pour ce qui concerne l’étude de leurs fonctions, mais également pour comprendre comment les utiliser afin d’établir des diagnostics peu invasifs.

Nous proposons une large gamme de produits et autres réactifs, outils et protocoles Invitrogen Dynabeads, conçus pour l’isolement, la caractérisation et l’analyse de leur teneur en ARN et en protéines, ainsi que pour le traçage in vitro et in vivo, afin de vous aider à mieux comprendre les exosomes.

Foire aux questions sur la recherche sur les exosomes

Produits associés à la recherche sur les exosomes

Isolement des exosomes totaux

Les procédures d’ultracentrifugation peuvent se révéler longues et fastidieuses. Désormais, vous pouvez facilement accroître la quantité d’exosomes intacts obtenus à partir de divers échantillons de départ grâce aux réactifs d’isolement des exosomes totaux Invitrogen, flexibles et évolutifs. Ces réactifs, ainsi que leurs protocoles d’accompagnement, sont parfaitement adaptés à toute une série de préparations expérimentales, y compris la distribution de petits volumes et la manipulation d’échantillons multiples.

Isolement des sous-populations d’exosomes

Les exosomes totaux enrichis par culture cellulaire (au moyen de réactifs d’isolement des exosomes totaux ou d’une procédure d’ultracentrifugation) peuvent être soumis à une purification encore plus poussée dans des sous-populations spécifiques par capture immunomagnétique. Utilisez le réactif CD9, CD63 ou CD81 Dynabeads ou le réactif EpCam ou bien associez le réactif de streptavidine et l’anticorps biotinylé de votre choix pour purifier une population basée sur un antigène de surface.

Il peut être difficile d’identifier visuellement les vésicules exosomaux, et les exosomes libres sont trop petits pour être détectés dans le flux. Il existe toutefois quelques méthodes pouvant être utilisées pour l’analyse.

Instrument NanoSight : les exosomes récupérés avec un réactif d’isolement des exosomes totaux peuvent être analysés à l’aide de l’instrument NanoSight, afin d’obtenir une plage de dimensions et une concentration approximatives.
Microscopie optique : l’ARN ou les composants membranaires des exosomes peuvent être marqués de manière à pouvoir visualiser les exosomes au microscope. Les colonnes de centrifugation spéciales Invitrogen permettent d’éliminer les colorants non incorporés. Ces colonnes permettent également l’échange de tampons et facilitent le dessalage ou le retrait de contaminants à faible poids moléculaire (< MW 3 000) par rapport aux méthodes actuelles.
Microscopie électronique (ME) : l’un des avantages liés à l’utilisation de la technologie de séparation magnétique Invitrogen Dynabeads pour extraire des exosomes purs et spécifiques tient au fait que vous pouvez procéder directement à l’analyse par ME. Vous pouvez analyser des sous-ensembles provenant d’exosomes totaux enrichis par culture cellulaire à l’aide du réactif Invitrogen CD9, CD63, CD81 ou EpCam ou utiliser le réactif de streptavidine Invitrogen en association avec l’anticorps biotinylé de votre choix.
Cytométrie en flux : la capture immunomagnétique d’exosomes à la surface des Dynabeads permet de détecter de manière claire et précise une diffusion avant (FFC) / latérale (SSC), généralement en moins d’une heure. Vous pouvez analyser des sous-ensembles provenant d’exosomes totaux enrichis par culture cellulaire à l’aide du réactif CD63 ou utiliser le réactif de streptavidine en association avec l’anticorps biotinylé de votre choix.

Il est prouvé que les exosomes transportent une série de molécules d’une cellule à l’autre. Leur charge comprend des protéines, des lipides, des ARNm (fragments et pleine longueur), des ARNr, des miARN ainsi que divers ARNnm.

Isolement de l’ARN et des protéines : vous pouvez isoler simultanément les protéines et l’ARN total provenant d’un même échantillon d’exosomes préenrichis grâce au kit d’isolement de l’ARN et des protéines des exosomes totaux Invitrogen. Ce kit est compatible avec tous les protocoles pour l’isolement d’exosomes.
Analyse protéique : des anticorps monoclonaux spécifiques (CD9, CD63 et CD81) permettent de détecter les antigènes cellulaires et exosomaux grâce à l’analyse par transfert Western. Pour comparer plusieurs échantillons de protéines sur le même gel tout en conservant intacts les complexes protéiques exosomaux, vous devez suivre la méthode d’immunoprécipitation Dynabeads, rapide et douce, en associant la protéine A ou la protéine G Invitrogen et l’anticorps primaire de votre choix.
Analyse de l’ARN : analysez l’ARN exosomal récupéré à l’aide du kit d’isolement de l’ARN et des protéines des exosomes totaux, par exemple par PCR quantitative en temps réel, en utilisant des dosages Applied Biosystems TaqMan, le séquençage d’ARN ou des outils de séquençage nouvelle génération. L’ARN et les composants membranaires des exosomes peuvent être marqués à l’aide de colorants fluorescents, tandis que les colorants non incorporés peuvent être éliminés à l’aide de colonnes de centrifugation Invitrogen dédiées.

Le sérum de veau fœtal appauvri en exosomes Gibco surpasse largement les produits similaires actuellement disponibles sur le marché.

Appauvrissement d’exosomes ≥ 90 %
Tests de culture cellulaire pour chaque lot
Conception spécifique pour la recherche sur les exosomes

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Isolement d’exosomes

Isolement des exosomes totaux

Isolement des sous-populations d’exosomes

Analyse d’exosomes intacts

Instrument NanoSight : les exosomes récupérés avec un réactif d’isolement des exosomes totaux peuvent être analysés à l’aide de l’instrument NanoSight, afin d’obtenir une plage de dimensions et une concentration approximatives.
Microscopie optique : l’ARN ou les composants membranaires des exosomes peuvent être marqués de manière à pouvoir visualiser les exosomes au microscope. Les colonnes de centrifugation spéciales Invitrogen permettent d’éliminer les colorants non incorporés. Ces colonnes permettent également l’échange de tampons et facilitent le dessalage ou le retrait de contaminants à faible poids moléculaire (< MW 3 000) par rapport aux méthodes actuelles.
Microscopie électronique (ME) : l’un des avantages liés à l’utilisation de la technologie de séparation magnétique Invitrogen Dynabeads pour extraire des exosomes purs et spécifiques tient au fait que vous pouvez procéder directement à l’analyse par ME. Vous pouvez analyser des sous-ensembles provenant d’exosomes totaux enrichis par culture cellulaire à l’aide du réactif Invitrogen CD9, CD63, CD81 ou EpCam ou utiliser le réactif de streptavidine Invitrogen en association avec l’anticorps biotinylé de votre choix.
Cytométrie en flux : la capture immunomagnétique d’exosomes à la surface des Dynabeads permet de détecter de manière claire et précise une diffusion avant (FFC) / latérale (SSC), généralement en moins d’une heure. Vous pouvez analyser des sous-ensembles provenant d’exosomes totaux enrichis par culture cellulaire à l’aide du réactif CD63 ou utiliser le réactif de streptavidine en association avec l’anticorps biotinylé de votre choix.

Isolement et analyse de la charge

Isolement de l’ARN et des protéines : vous pouvez isoler simultanément les protéines et l’ARN total provenant d’un même échantillon d’exosomes préenrichis grâce au kit d’isolement de l’ARN et des protéines des exosomes totaux Invitrogen. Ce kit est compatible avec tous les protocoles pour l’isolement d’exosomes.
Analyse protéique : des anticorps monoclonaux spécifiques (CD9, CD63 et CD81) permettent de détecter les antigènes cellulaires et exosomaux grâce à l’analyse par transfert Western. Pour comparer plusieurs échantillons de protéines sur le même gel tout en conservant intacts les complexes protéiques exosomaux, vous devez suivre la méthode d’immunoprécipitation Dynabeads, rapide et douce, en associant la protéine A ou la protéine G Invitrogen et l’anticorps primaire de votre choix.
Analyse de l’ARN : analysez l’ARN exosomal récupéré à l’aide du kit d’isolement de l’ARN et des protéines des exosomes totaux, par exemple par PCR quantitative en temps réel, en utilisant des dosages Applied Biosystems TaqMan, le séquençage d’ARN ou des outils de séquençage nouvelle génération. L’ARN et les composants membranaires des exosomes peuvent être marqués à l’aide de colorants fluorescents, tandis que les colorants non incorporés peuvent être éliminés à l’aide de colonnes de centrifugation Invitrogen dédiées.