NovaBright™ Phospha-Light™ EXP Assay Kit for SEAP (Secreted Placental Alkaline Phosphatase) Reporter Gene Detection

Das NovaBright™ Phospha-Light™ EXP Assay-Kit ist ein Chemolumineszenz-Reportergen-Assay der zweiten Generation für den ultraempfindlichen Nachweis sezernierter plazentarer alkalischer Phosphatase (SEAP) oder des nicht sezernierten plazentaren Isozymes PLAP. Dieser Assay kombiniert eine ultraempfindliche Detektion mit einem dynamischen Bereich mit 5 Größenordnungen. Das Assaysystem verwendet das leistungsstarke alkalische Phosphatase-Substrat CSPD™, einen herstellereigenen Chemolumineszenz-Enhancer der nächsten Generation sowie ein herstellereigenes Puffersystem, das speziell auf die Hemmung der Aktivität endogener, nicht plazentarer alkalischer Phosphatase ausgerichtet ist und die Leistung früherer Generationen von Chemolumineszenz-Assays sowie Kolorimetrie- und Fluoreszenz-Detektionsmethoden weit übertrifft. Dieses neue Kit bietet ein viel einfacheres Verfahren als andere Assays. Der Assay ist homogen und erfordert nur zwei Lösungen, die gebrauchsfertig geliefert werden. Die verlängerte Kinetik der Glimmlichtemission führt zu einem stabilen Lichtsignal und dadurch zu einer flexiblen Ablesezeit. Das Assay-Signal wird in einem einfachen Luminometer ohne Injektoren gemessen. SEAP ist ein Reporterprotein, das in das Zellkulturmedium abgesondert und durch die Prüfung der Aliquoten des Mediums nachgewiesen wird. Da SEAP in das Medium freigesetzt wird, ist eine Zelllyse unnötig. Der Assay ermöglicht jedoch auch den Nachweis von Isoenzymen von plazentaren alkalischen Phosphasen (PLAP) nach der Zelllyse. Die empfindliche Detektion des Alkalische-Phosphatase-Reporterenzyms ermöglicht eine große Anzahl von Anwendungen in vielen Bereichen der biowissenschaftlichen Forschung, einschließlich Genexpression, viraler Funktionsassays, Impfstoffentwicklung, Entwicklung von Virusvektoren und Gentransfermethoden für die Gentherapie, In-vivo-Genexpressionsüberwachung und neuartiger zellulärer Funktionsassays. Dieser SEAP-Assay ist eine der einfachsten und schnellsten Methoden zur Optimierung der Transfektionseffizienz. Frühere Generationen des NovaBright™ Secreted Placental Alkaline Phosphatase (SEAP) Enzyme Reporter Gene Chemiluminescent Reporter Gene Detection Kit 2.0 wurden häufig für Reportergen-Assays zur Messung der Genexpression in etablierten Zelllinien und transfizierten Primärzellen eingesetzt, unter anderem zur Bestimmung von Gen-Knockdown/RNA-Interferenz. Dieser Assay wurde für eine Vielzahl von viralen Funktionsassays verwendet, darunter Assays zur viralen Genexpression, viralen Replikation, viralen Fusogenität, Virusneutralisierung und viral-vermittelten Zell-Zell-Fusion sowie der viralen Infektiosität. Die Verwendung des SEAP-Reporterproteins ist sehr gut für In-vivo-Reportergen-Assays geeignet, indem Serumproben von transgenen, transfizierten oder mit viralen Vektoren infizierten Tieren getestet werden. Das NovaBright™ Reportergen-Assaysystem wurde zur Messung der SEAP-Konzentrationen in Seren transgener oder transfizierter ganzer Tiere, einschließlich der Seren von Maus, Ratte, Marmoset, Affe und Schwein, sowie in Allantois-Flüssigkeit von Hühnereiern verwendet. Das Maus-SEAP-Protein (mSEAP) wurde kürzlich für eine verbesserte SEAP-Proteinstabilität bei transgenen Mäusen entwickelt, und der NovaBright™ SEAP-Assay wurde für die sensible Detektion von mSEAP verwendet. Neben Reportergen-Anwendungen (Genexpression) dient das Assaysystem zur Messung von SEAP als funktionaler Reporter für Rezeptor-Ligand-Bidungsassay mit einer SEAP-Ligand-Chimäre, Protease-vermittelter Sekretion und für Sekretionswegaktivität. Das NovaBright™ Assaysystem kann zur zellulären Messung von nicht plazentarer alkalischer Phosphatase als Biomarker verwendet werden.