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福尔马林固定和石蜡包埋(FFPE)组织是疾病机制的回顾性临床研究中使用最为广泛的标本。 这些归档材料提供了一个稳定的基因表达分析核酸的重要来源,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)或微阵列分析。 PCR技术已经成为分子检测领域中较为普遍的技术,它已经提高了FFPE组织的临床应用;例如:档案组织的回顾分析能利用分子之间的联系进行治疗并得出临床结果。

哪种FFPE样本中的RNA分离试剂盒更适合你?

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RNA每10微米节预计产量 1微克   3.5 µg   3 µg
准备时间 30 分钟   2 小时   3 hours
(for 96 preps)
最终产品提取 总 RNA   Total RNA, microRNA, gDNA   Total RNA, microRNA, gDNA
需要有机溶剂去石蜡化(二甲苯)     是的    
高通量兼容         是的
兼容FFPE样本范围 3–8 x 10微米节   高达4 x 20微米节   2X10微米节
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为什么从FFPE中分离RNA是如此困难?

FFPE标本中高质量的RNA恢复可能相当具有挑战性。 固定过程会引起除甲基组到基底外的核酸、蛋白质及共价修饰RNA之间的交联。 因此,分子是刚性的,容易受到机械剪切,并且交叉链接可能会危及RNA逆转录基板的使用。 因此,为了充分利用FFPE组织作为基因表达分析的来源,一种可靠的方法是需要通过交联矩阵来提取的RNA。

你如何使用FFPE来提高你成功的机会?

有许多因素会影响FFPE组织的RNA分离整体质量和产量。 这里有几条建议,以解决几个关键因素:

  1. 上游组织采购和组织标本制备如果可能的话,组织应固定在一个小时内的手术切除。 广泛可降解的RNA能在固定过程完成前发生。 最佳固定时间12 - 24小时,使用中性福尔马林或聚甲醛。 固定的组织应该在包埋过程前彻底脱水。
  2. Block storage—无切面的存储块,在可能的情况下,能防止来自于大气中的氧气、水及其他环境因素如光侵扰(真菌、昆虫等)的持续伤害。
  3. Tissue type, size, and amount being used for RNA isolation—the recommended tissue thickness is 10–20 µm The number of sections used is determined by the tissue type (which impacts cell density) and surface area (recommended size: 50–300 mm2). 多余的初始原料可导致过滤器堵塞并会降低产量。
  4. 石蜡包埋组织的过量使用—如果可能,在进行纯化方案之前应削去多余的石蜡。 对于二甲苯净化方法,在室温下进行二甲苯治疗应该足以完整去石蜡化。 如果需要,更严格的37-55°C治疗能最多持续30分钟。 二甲苯去石蜡化之后,至关重要的是100%的乙醇将被完全去除,并且两个100%的乙醇洗涤之后的颗粒是干燥的。 磁珠法采用新型化学处理20微米切片限制输入的石蜡。

 

MagMAX™ FFPE核酸(NA)分离试剂盒是专为快速、高效、自动化的Total RNA分离和使用的MagMAX™磁性粒子技术的FFPE样本的DNA。 MagMAX™ FFPE 核酸(NA)试剂盒在整个过程中能在保证质量的前提下提供更快的工作流程并使用毒性较低的试剂。 相比核酸的产量和纯度,这些试剂盒帮助提供最佳的RecoverAll™过滤系统。 MagMAX™ FFPE核酸(NA)试剂盒超越了具有类似实验方案的产品,并且实现了与更长、更危险、较低吞吐量的实验方案相媲美的RNA和DNA产量。

RecoverAll™总核酸分离试剂盒的过程需要大约45分钟的动手时间,当分离RNA时可以很容易地在不到1天的时间内完成。 FFPE样本是使用二甲苯和乙醇洗涤系列进行脱蜡的。 接下来,在RNA或DNA恢复定制的孵化时间内,他们都受到了严格的蛋白酶消化。 使用快速玻璃过滤器的方法进行核酸纯化,包括一个过滤器上的核酸处理,并提供被洗脱进入水或低盐缓冲中。

技术资料

技术说明文章

 
实验室提示


你的数据

  • 实时RT-PCR上的LCM染色效果: 研究表明,Ambion LCM染色试剂盒可以在不影响产量或RNA分离质量的前提下成功地用于福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织而。

 

应用说明

 

产品简报: