Thermo Scientific™

Pierce™ 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set

Katalognummer	Menge
24570	1 L

Katalognummer 24570

Preis (EUR)

490,00

Menge:

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Preis (EUR)

490,00

Das Thermo Scientific Pierce Färbereagenzkit für 6xHis-Protein-Tag ist ein Fluoreszenzfarbstoff für den bevorzugten Nachweis von rekombinanten Fusionsproteinen mit Histidin-Tag (His-Tag) in Protein-Polyacrylamidgelen.

Der einzigartige Fluoreszenzfarbstoff erkennt Histidin-getaggte Fusionsproteine, die in Polyacrylamidgelen elektrophorisch getrennt wurden (z. B. SDS-PAGE). Mit dieser Färbung kann die Expression rekombinanter Proteine mit His-Tag direkt im Gel beurteilt werden. Dadurch entfallen Membrantransfer und Western Blotting, mit denen Reinheit und Ausbeute markierter Proteine normalerweise bestätigt werden. Obwohl die untere Nachweisgrenze von der verwendeten UV-Lampe (300 nm) und der Detektionsausrüstung (am besten CCD-Kamera) abhängen, ist das Färbemittel für die prozessbegleitende Beurteilung der Produktion His-getaggter Proteine geeignet und mit der anschließenden Färbung mit Coomassie-Farbstoff und anderen Gesamtproteinfärbungen kompatibel.

Merkmale des Färbereagenzkit für 6xHis-Protein-Tag

• Zwei- bis dreimal schneller als Western Blotting – erzielen Sie Ergebnisse schneller und sparen Sie wertvolle Forschungszeit
• Direkter Nachweis auf dem Gel – kann die Notwendigkeit eines Membrantransfers und eines Western-Blot-Schrittes für den Nachweis von mindestens 0,2 μg 6xHis-getaggten Proteins beseitigen
• Gebrauchsfertige Formel mit zwei Reagenzien – ohne Mischen, ohne Verdünnung und ohne Aufwand; garantiert ein einfach auszuführendes, fehlerfreies Nachweisprotokoll
• Spezifische Fluoreszenzdetektion von 6xHis-getaggten Proteinen – sehen Sie nur das, was Sie sehen möchten (für Proteine mit geringer Konzentration wird eine CCD-Kamera empfohlen; für Proteine mit hoher Konzentration ein UV-Transilluminator)
• Kompatibel mit Doppelfärbung – Verfolgen der Färbung His-getaggter Proteine mit dem Thermo Scientific GelCode blauen Färbereagenz zur Bestimmung eines vollständigen Proteinprofils

Enthält:
• Färbemittel- und Entwicklerlösungen (je 500 ml)

Erfordert:
• UV-Lichtquelle (300 nm) und CCD-Kamera

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications

BeschreibungPierce Färbereagenzkit für 6xHis-Protein-Tag

DetektionsstelleIn-Gel-Detektion

NachweisverfahrenFluoreszent

Menge1 L

ZielmolekülProteine (His-getaggt)

Marker oder FarbstoffProprietäre Mischung

ProduktliniePierce

ProdukttypFärbekit für Proteine mit His-Tag

Unit SizeEach

Inhalt und Lagerung

Komponenten bei Raumtemperatur lagern. Das Produkt wird bei Umgebungstemperatur versendet.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

I used the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set to detect my 6xHis-tagged protein but am also detecting non-tagged proteins. Why is this?

This is likely due to weak cross-reaction staining of proteins containing histidine clusters. Here are our recommendations:

- Wash gel for additional time in water (step 5.)
- Slightly decrease staining time (step 2.)
- Adjust exposure time and other settings to minimize weak, non-specific staining.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

With the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set, I was able to detect the positive control but not the experimental protein. What happened?

Here are possible causes and solutions:

- Experimental protein not expressed at sufficient levels in the lysate being tested. Load more lysate per lane or otherwise check that the target protein is expressed at all.
- Experimental recombinant protein is not tagged with 6xHis. Check for presence of tag by an independent method (e.g., detection or purification by nickel-chelate chemistry.
- 6xHis tag on experimental protein is blocked by interfering substances in sample. Verify that nickel and other 6xHis-binding reagents were not brought forward from a previous step and use only high-quality water.

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I used the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set but was not able to detect any bands for either the positive control or experimental protein. What possibly went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Poor quality or insufficient exposure to appropriate UV-light source. If possible, use a CCD camera for detection; ensure that UV lamp delivers the appropriate wavelength for excitation (280-310 nm).
- Experimental protein is poorly expressed (insufficient loading). Insufficient protein was electrophoresed per lane for the detection method used.
- Insufficient washing; residual SDS in gel prevents binding of stain. Wash gel for 3 × 20 minutes in ultrapure water and restain .
- Experimental protein is small (less than 20kDa) and diffused from gel during washing step. Fix the gel 50% methanol:7% acetic acid for 15 minutes before performing the water wash.
- Poor diffusion of stain into gel. Increase staining time to 10 minutes (step 2); this may be repeated on the same gel.

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With the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set, how long will the fluorescent signal remain stable after the gel is stained'?

The fluorescent signal is stable for several hours in gels stored in water. Signal may be detectable, if somewhat attenuated, after overnight storage.

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Is there a fixation step in the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set staining procedure?

There is no fixation step in the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set staining procedure. Hence, staining with this kit does not inhibit subsequent total protein staining with general protein stains, or electrophoretic transfer to membrane. Note: Bis-Tris gels run in MOPS or MES buffer may require fixing in 50% methanol: 7% acetic acid for 15 minutes before performing the stain procedure. After electrophoresis, fix the gel and then proceed with Step 1 of the procedure.

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