Pierce™ 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set
Pierce™ 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set
Thermo Scientific™

Pierce™ 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set

El conjunto de reactivos de tinción con etiqueta de proteína 6xHis Pierce Thermo Scientific es una tinción fluorescente para laMás información
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Número de catálogoCantidad
245701 L
Número de catálogo 24570
Precio (MXN)
-
Cantidad:
1 L
Pedido a granel o personalizado
El conjunto de reactivos de tinción con etiqueta de proteína 6xHis Pierce Thermo Scientific es una tinción fluorescente para la detección preferente de proteínas de fusión recombinantes etiquetadas con histidina (etiquetadas con His) en geles de poliacrilamida de proteínas.

La exclusiva tinción fluorescente detecta de forma específica las proteínas de fusión etiquetadas con histidina que se han sometido a electroforesis en geles de poliacrilamida (por ejemplo, SDS-PAGE). Con esta tinción, la expresión de proteínas recombinantes etiquetadas con His se puede evaluar directamente en gel, eliminando la transferencia de membrana y los pasos de inmunotransferencia (Western Blotting) que se suelen utilizar para confirmar la pureza y el rendimiento de las proteínas etiquetadas. Aunque el límite inferior de detección depende de qué lámpara UV (300 nm) y equipo de detección (mejor la cámara CCD) se utilicen, la tinción es práctica para evaluar proteínas etiquetadas con His en el proceso de producción y es compatible con la tinción posterior con colorante de Coomassie y otras tinciones de proteínas totales.

Características del conjunto de reactivos de tinción con etiqueta de proteína 6xHis:

De dos a tres veces más rápido que Western Blotting: obtenga resultados más rápidos y ahorre horas de valioso tiempo de investigación
Detecta directamente en el gel: puede eliminar la necesidad de una transferencia de membrana y el paso Western Blot para la detección de al menos 0,2 µg de proteínas etiquetadas con 6xHis
Fórmula de dos reactivos lista para usar: sin mezclar, sin diluir y sin complicaciones; garantiza un protocolo de detección sencillo y sin errores
Detección fluorescente específica de proteínas etiquetadas con 6xHis: vea solo lo que quiera ver (cámara CCD recomendada para proteínas de baja abundancia y transiluminador UV para proteínas abundantes)
Compatible con tinción doble: siga la tinción de proteínas etiquetadas con His con el reactivo de tinción azul Thermo Scientific GelCode para la determinación del perfil de proteínas totales

Incluye:
• Soluciones de tinción y revelado (500 ml cada una)

Requiere:
• Fuente de la lámpara UV (300 nm) y cámara CCD
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
DescripciónConjunto de reactivos de tinción con etiqueta de proteína 6xHis Pierce
Ubicación de detecciónDetección en gel
Método de detecciónFluorescente
Línea de productosPierce
Tipo de productoSu conjunto de tinción de proteínas con etiqueta
Cantidad1 L
Molécula dianaProteínas (etiquetadas con His)
Etiqueta o tinteMezcla patentada
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Almacenar componentes a temperatura ambiente. El producto se envía a temperatura ambiente.

Preguntas frecuentes

I used the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set to detect my 6xHis-tagged protein but am also detecting non-tagged proteins. Why is this?

This is likely due to weak cross-reaction staining of proteins containing histidine clusters. Here are our recommendations:

- Wash gel for additional time in water (step 5.)
- Slightly decrease staining time (step 2.)
- Adjust exposure time and other settings to minimize weak, non-specific staining.

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With the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set, I was able to detect the positive control but not the experimental protein. What happened?

Here are possible causes and solutions:

- Experimental protein not expressed at sufficient levels in the lysate being tested. Load more lysate per lane or otherwise check that the target protein is expressed at all.
- Experimental recombinant protein is not tagged with 6xHis. Check for presence of tag by an independent method (e.g., detection or purification by nickel-chelate chemistry.
- 6xHis tag on experimental protein is blocked by interfering substances in sample. Verify that nickel and other 6xHis-binding reagents were not brought forward from a previous step and use only high-quality water.

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I used the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set but was not able to detect any bands for either the positive control or experimental protein. What possibly went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Poor quality or insufficient exposure to appropriate UV-light source. If possible, use a CCD camera for detection; ensure that UV lamp delivers the appropriate wavelength for excitation (280-310 nm).
- Experimental protein is poorly expressed (insufficient loading). Insufficient protein was electrophoresed per lane for the detection method used.
- Insufficient washing; residual SDS in gel prevents binding of stain. Wash gel for 3 × 20 minutes in ultrapure water and restain .
- Experimental protein is small (less than 20kDa) and diffused from gel during washing step. Fix the gel 50% methanol:7% acetic acid for 15 minutes before performing the water wash.
- Poor diffusion of stain into gel. Increase staining time to 10 minutes (step 2); this may be repeated on the same gel.

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With the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set, how long will the fluorescent signal remain stable after the gel is stained'?

The fluorescent signal is stable for several hours in gels stored in water. Signal may be detectable, if somewhat attenuated, after overnight storage.

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Is there a fixation step in the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set staining procedure?

There is no fixation step in the Thermo Scientific 6xHis Protein Tag Stain Reagent Set staining procedure. Hence, staining with this kit does not inhibit subsequent total protein staining with general protein stains, or electrophoretic transfer to membrane. Note: Bis-Tris gels run in MOPS or MES buffer may require fixing in 50% methanol: 7% acetic acid for 15 minutes before performing the stain procedure. After electrophoresis, fix the gel and then proceed with Step 1 of the procedure.

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