GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit
GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit
Invitrogen™

GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit

El vector de nucleasa GeneArt™ CRISPR con el kit OFP Reporter es un sistema de vectores para la expresión deMás información
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Número de catálogoCantidad
A2117410 reactions
Número de catálogo A21174
Precio (MXN)
-
Cantidad:
10 reactions
El vector de nucleasa GeneArt™ CRISPR con el kit OFP Reporter es un sistema de vectores para la expresión de los elementos funcionales necesarios para la edición de genomas CRISPR/Cas9 en células de mamíferos con una marcación de proteína fluorescente naranja (OFP). La marcación de OFP permite realizar un seguimiento basado en fluorescencia de la eficacia de la transfección, así como una clasificación basada en un separador de células activadas por fluorescencia (FACS)/enriquecimiento de células que expresan Cas9 y CRISPR. Los vectores de nucleasa linealizados CRISPR GeneArt™ ofrecen un método rápido y eficaz para clonar oligonucleótidos bicatenarios a través de una codificación de ARNcr que representa un objetivo deseado en un casete de expresión que permite el etiquetado específico de secuencia de la nucleasa Cas9. También está disponible una versión con células competentes (n.º N.º de cat. A21178).

El sistema de vector de nucleasa de CRISPR GeneArt™ ofrece:
• Sistema de estructuración de genoma fácil de diseñar
• Vectores de clonación asequibles y listos para su uso
• Enriquecimiento para líneas de células difíciles de transfectar complicadas de modificar

Sistema vectorial todo en uno para la edición genómica basada en CRISPR
El kit de vectores de nucleosa de CRISPR GeneArt™ ofrece un sistema vectorial de expresión simple, listo para usar, todo en uno, que consta de un casete de expresión de nucleasa Cas9 y un casete de ARN guía (RNAg) para clonar de forma rápida y eficaz el ADN que codifica el ARN CRISPR específico del objetivo (crRNA). Este sistema le permite editar y diseñar el locus genómico que elija de forma específica de secuencia a partir de un único plásmido. Una vez identificados los objetivos relevantes con vectores de CRISPR GeneArt™ rápidos y fáciles de usar, las mutaciones biológicamente relevantes pueden crearse precisamente con los TAL de precisión GeneArt™, con alta especificidad y bajos efectos fuera del objetivo.

¿Necesita ayuda con el diseño ARNg de CRISPR?
Nuestra nueva herramienta de búsqueda y diseño de CRISPR le permite buscar en nuestra base de datos de > 600 000 ARNg de CRISPR prediseñados en genes humanos y de ratón o analizar su secuencia de interés para diseños ARNg de novo utilizando nuestros exclusivos algoritmos. Las secuencias CRISPR están optimizadas para Knockout genético y se centran en los tres primeros exones transcritos para cada gen. Los resultados de la búsqueda incluyen las 6 principales secuencias CRISPR con puntos PAM, mapas de exones con puntos de unión de ARNg y posibles puntos de unión inespecíficos para cada secuencia CRISPR. La herramienta diseñará el formato de ARNg correcto para el producto CRISPR-Cas9 preferido, incluidos oligonucleótidos para su vector de nucleasa de CRISPR GeneArt™. Comience a diseñar hoy >
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Método de clonaciónEnzimas de restricción/MCS
FormatoKit
N.º de reacciones10 reacciones
Sobrante3' overhangs
Línea de productosGeneArt
Tipo de productoVector de nucleasa Crispr con kit de marcación de proteína fluorescente naranja (OFP)
PromotorU6, CMV
Etiqueta de proteínaFusión de OFP
Cantidad10 reactions
Gen marcadorOFP
Material de partidaOligos (DNA)
Suficiente para10 reacciones
TécnicaCRISPR-Cas9
Método de detecciónSonda de cebado
Para utilizar con (aplicación)Gene Expression, Cloning
FormularioLíquido
Velocidad de reacciónFast
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Contiene:
• Vector de nucleasa CRISPR OFP, linearizado
• Tampón de recocido de oligonucleótido 10X
• Agua sin ADNasa/ARNasa
• Tampón de ligado 5X
• ADN ligasa T4
• Primer de secuenciación de avance U6
• Oligonucleótido bicatenario de control

Almacene en congelador (de - 5 a - 30 °C).

Preguntas frecuentes

What is CRISPR-STOP?

CRISPR-STOP is a method of inserting STOP codon sequences to generate knockouts.

Please refer to the following article: CRISPR-STOP: gene silencing through base-editing-induced nonsense mutations.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Genome Editing Support Center.

What transfection methods do you recommend when working with your CRISPR products?

For transfecting of the Cas9 protein, we would recommend using the Neon transfection system or Lipofectamine CRISPRMAX Cas9 Transfection Reagent. For transfection of mRNA, we would recommend using Lipofectamine MessengerMAX Transfection Reagent. For transfection of CRISPR vectors, we would recommend using Lipofectamine 3000 Transfection reagent.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Transfection Support Center.

Do you have CRISPR products optimized for plants?

Our CRISPR products are optimized for mammalian systems, and have not been optimized for plant systems. However, we know researchers are doing that kind of work. While we have not tested our CRISPR products for plants, our new protein format would be ideal since it does not need to be translated and transcribed in the cell, so no plant-specific promoters required.

What are the benefits of using TAL/TALEN-based genome editing compared to your CRISPR system?

Invitrogen GeneArt Precision TALs, in addition to gene deletion, down-regulation and integration, can also be used for gene activation. Additionally, the system is based on a protein-DNA system, in contrast to CRISPR, which is based on a RNA-DNA system. TALs can be used to target any gene in any cell, including mammalian, bacterial, yeast, plants, insect, stem cells and zebrafish. Lastly, off-target effects are low when using the TAL system. Please refer to the following paper (http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S016816561500200X) where the authors compared TALs and CRISPR technology.

I am using the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector Kit and am getting very few ampicillin-resistant colonies on my selection plate. What could be the cause of this? Do you have any suggestions?

Here are possible reasons and solutions:

- Single-stranded (ss) oligonucleotides designed incorrectly; Make sure that each ss oligonucleotide contains the 5 nucleotides on the 3′ end required for cloning into the Invitrogen GeneArt CRISPR Nuclease Vector: ie., Top strand includes GTTTT on the 3′ end; Bottom strand includes CGGTG on the 3′ end.

- Double-stranded (ds) oligonucleotides were degraded; Store the 5 nM ds oligonucleotide stock in 1X Oligonucleotide Annealing Buffer. Avoid repeated freeze/thaw cycles; aliquot the 5 nM ds oligonucleotide stock and store at -20°C.

- Oligonucleotide annealing reaction inefficient; Ensure that the annealing reaction was performed as directed. If ambient temperature is >25°C, incubate the annealing reaction in a 25°C incubator.

Citations & References (1)

Citations & References
Abstract
Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection.
Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Zou Y, Quintanilla R, Sridharan M, Carte J, Chen W, Roark N, Ranganathan S, Ravinder N, Chesnut JD,
Journal:
PubMed ID:26003884
'CRISPR-Cas9 systems provide a platform for high efficiency genome editing that are enabling innovative applications of mammalian cell engineering. However, the delivery of Cas9 and synthesis of guide RNA (gRNA) remain as steps that can limit overall efficiency and ease of use. Here we describe methods for rapid synthesis of ... More