Pierce™ Crosslink IP Kit

El kit de IP de entrecruzamiento Thermo Scientific Pierce adapta el método tradicional de IP para incluir reactivos y un protocolo para entrecruzar anticuerpos de IP con Proteína A/G agarosa para permitir la inmunoprecipitación de antígenos sin contaminación de anticuerpos.

Las principales ventajas de estas características son la capacidad para purificar la proteína diana sin contaminación por el anticuerpo y la capacidad para lavar y separar más eficazmente muestras de resina de agarosa granulada.

Características del kit de IP de entrecruzamiento:

• Elimina la contaminación de anticuerpos: el anticuerpo se une de forma irreversible a los gránulos de agarosa, de forma que se minimiza la coelución de cadenas ligeras y pesadas con la proteína purificada
• Escalabilidad sencilla y eficiente: utilice solamente la cantidad de anticuerpos necesaria para un único experimento de IP o inmovilice 100-200 µg de anticuerpo para preparar resina de afinidad IP lista para usar para muchos experimentos
• Fiabilidad de los ensayos y manipulación de muestras: las columnas de centrifugación Pierce eliminan la pérdida de resinas y ofrecen una separación de soluciones más eficaz que los métodos de IP tradicionales, que únicamente emplean tubos de microcentrífugas
• Resina de afinidad de anticuerpos preparada reutilizable: el anticuerpo se inmoviliza covalentemente y normalmente no se inactiva por el procedimiento de elución moderado, por lo que a menudo la resina se puede utilizar varias veces
• Kits completos: el paquete incluye reactivos suficientes y columnas de centrifugación suficientes para realizar al menos 50 inmovilizaciones de anticuerpos y experimentos IP

Aplicaciones:
• Inmunoprecipitación seguida por electroforesis y escisión de la proteína para espectrometría de masas o análisis de identificación de secuenciación
• Inmunoprecipitación y análisis SDS-PAGE de una proteína diana cuyo peso molecular sea similar al fragmento de anticuerpos de cadena ligera o pesada
• Inmunoprecipitación de proteínas objetivo para su posterior análisis por métodos no desnaturalizantes (es decir, métodos que no impliquen SDS-PAGE)

El kit de IP de entrecruzamiento Pierce implica capturar el anticuerpo de IP en resina de proteína A/G-agarosa e inmovilizarlo de forma covalente en el soporte mediante el entrecruzamiento con disuccinimidil suberato (DSS). A continuación, la resina de anticuerpo se incuba con la muestra que contiene el antígeno de proteína de interés, permitiendo que se forme el complejo de anticuerpo:antígeno. Después del lavado para eliminar componentes no unidos (presumiblemente no deseados) de la muestra, el antígeno se recupera disociándolo del anticuerpo con el tampón de elución incluido en el kit. Todo el procedimiento se realiza en un vaso de giro de microcentrífuga, permitiendo que las soluciones se separen completamente de la resina de agarosa con una breve centrifugación. Con este procedimiento solo se eluye el antígeno, por lo que puede ser identificado y analizado después sin interferencias de fragmentos de anticuerpo. Además, la resina de anticuerpos se puede reutilizar para realizar rondas adicionales de inmunoprecipitación.

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