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概述

此处收录了一些转染效率低的可能原因及其相应的解决方案。

此处是一些转染后细胞活性降低的可能原因及其相应的解决方案。请注意,最近研究发现,转染过程中可在培养基中使用抗生素。我们对多个细胞系在含与不含抗生素的培养基中的转染效果进行了比较,同时评估其转染效率和细胞毒性,结果显示并无差别。对稳定转染而言,转染操作后至少等待72小时以上,再加入选择性抗生素。

请查看这份转染重复性不佳的可能原因与解决方案。同时,我们也建议为多次转染操作配制一份总的DNA/脂质体复合物预混液,以减少多次取样所导致的误差。当加入DNA/脂质体复合物时,我们推荐在不同孔之间更换枪头,因为重复使用同一枪头会带入残留,特别是对于96孔或384孔板小体积形式而言影响可能更大。

脂质体转染后在细胞上观察到沉淀的通常原因是体系中EDTA或阳离子脂质体过量。我们推荐用水稀释DNA,如果希望使用TE溶液,则EDTA的浓度应低于0.3 mM。同时请确保在复合物配制过程中,阳离子脂质体试剂的浓度不要超过推荐用量。细胞上这一沉淀物的存在与否与转染效率之间并无相关性。

我们推荐您尝试使用电转法来转染您感兴趣的质粒进入细胞。我们提供Neon®转染系统来帮助用户高效地转染原代细胞、干细胞以及一些难以转染的细胞。

您也可尝试使用病毒系统来转导您研究的基因进入到您感兴趣的哺乳动物细胞系中。

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